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F-4600,7000 光谱校正步骤(中).pdf
F-4600/7000 光谱校正步骤
天美科技有限公司
(安 平 编译)
(一)激发单元(EX )仪器函数的测量
1 .1 罗丹明 B 的使用方法
由于激发单元分光器的波长特性等原因,必须采用罗丹明 B 作为光量子计来对激发
单元进行仪器的函数校正。仪器函数的读出存入自动进行,只需一次波长扫描即可。可以校
正的波长范围为 200~600nm。
参考图-1 将罗丹明 B 的注入到三角池中。平时请将罗丹明B 保存在暗处。
图-1 罗丹明 B 的加入方法
1.2 操作步骤
(1) 双击【Method 】图标进入分析条件画面。
(2 ) 在【General 】菜单中选择【Wavelength scan 】波长扫描方式。
(3 ) 进入【Instrument 】仪器菜单。
(4 ) 数据模式选择【Fluorescence 】荧光,光电倍增管高压设定为为400V ,扫描模式选
择【Excitation 】激发光谱。
(5 ) 展开工具栏中【Spectrophotometer】光度计菜单,选定【Zero 】,对仪器进行调零。
(6 ) 参考图-2 所示,将盛有罗丹明 B 的三角池放入样品室的池架里,安装滤光片支
架,并将红色滤光片插入其中;这时需要注意三角池和滤光片的安装方向(参考
图-3 )。
盛有罗丹明 B 的三角池 滤光片支架 红色滤光片
图-2 安放罗丹明 B 和滤光片
1
图-3 三角池和滤光片的方向
备 注:当光电倍增管电压的设置有很大的变动不久(例如:700V→250V),由于检测器的特
性的原因,要想使测试数据达到稳定的状态则需要一定的时间。因此正确的调零是要等待仪
器稳定后再实施。
(7 )展开工具栏中的【Utility 】实用菜单中的【Instrumental Response 】仪器响应菜单,实
施仪器的函数测量。图-4 是仪器函数测量的显示栏。从中选定 “ EX (200 to 600nm) ”
项(参考图-4 ①)。
图-4
(8 )点击【Run 】钮(参考图-4 ② )后,一个“请放置罗丹明 B 和红色滤光片”的信息
提示栏出现,然后将盛有罗丹明 B 的三角池和红色滤光片分别放置妥当后,点击【OK】钮 (参
考图-5 ③ )
图-5
2
(9 )发射波长被设定在640nm,激发波长 (198.6-601.4nm) 扫描开始。
测量条件如下所示被自动设定:
Scan mode : :Excitation (激发)
Data mode :Fluorescence (荧光)
Ex slit :5.0 nm
Em slit :20.0nm
Scan speed :60nm/min
PTM voltage :400V
Response :Auto
(10)测量结束后测量条件返回以前的设置。至此、激发单元的函数测量、记忆完成。请将
罗丹明 B 和滤光片取出。
(二)发射单元(EM )仪器函数的测量
2.1 概 述
由于发射侧单色器波长特性及检测器的波长特性等原因,需要求出发射单元的仪器函
数。用先前已经被校正过的激发单元分光器的发出的光作为基准,然后激发/发射两
波长做同步扫描,于是激发、发射两方的仪器函数被组合求出;再将这个函数值除以
先前得到的激发单元的仪器函数值就求出了发射单元的
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