miRNA荧光定量PCR试剂盒说明书.docVIP

HG miRNA SYBR Green PCR Kit HG miRNA荧光定量PCR试剂盒 Cat.No.:APXXXXX Size: 100次×20 μl 描述：HaiGene的HG miRNA SYBR Green PCR Kit使用Peter改良的miR-Q技术，采用特异性的上下游引物对反转录所得miRNA的cDNA产物进行定量检测【参考文献1】。不同于其它公司的单条特异性引物扩增方法，HaiGene采用双向特异性扩增引物（原理如图1），从而极大提高了miRNA的检测特异性，其可以区分极高相似度的miRNA分子、减少非特异性扩增（图2，3所示）。该试剂盒对可以对任何miRNA分子进行检测。HG miRNA荧光定量PCR试剂盒共有一万余种，试剂盒编号为PXXXXX，每一个miRNA分子对应一个检测试剂盒，可于HG miRNA qPCR kit.xls中查询。如果您研究的mircoRNA分子不在我们的列表中，请来信咨询，我们将及时给您优化设计。该试剂盒中的每一对引物均经过设计优化，确保扩增效率和特异性。使用该方法进行miRNA定量检测已被大量文献所采用【参考文献2～11】。 组分 名称 (T×20 μl) 5×Golden HS SYBR Green qPCR Mix 400 μl 50×ROX Reference Dye 40 μl 20×miRNA Primer F 100 μl 20×miRNA Primer R 100 μl 储存：置于-20°C，可保存2年；避免反复冻融 RNU6B AP01501 哺乳动物 RNU44 AP01502 人 RNU48 AP01503 人 SnoRNA135 AP01504 鼠 SnoRNA202 AP01505 鼠 注：其它miRNA荧光定量检测试剂盒见HG miRNA qPCR kit.xls。 图1Peter改良miR-Q检测原理图图2高效的扩增miRNAs 图3有效的区分相似度很高的miRNAs HG miRNA荧光定量PCR试剂盒 Cat.No.:APXXXXX Size: 100次×20 μl 操作方法 1. 按以下组分配制反转录反应液 microRNA（0.01-0.1 μg）or Total RNA 0.1-2 μg 4×One step miRNA RT Solution 5 μl *10×miRNA RT Primer 2 μl Rnase Free H2O Up to 20 μl 2. 在PCR仪上按以下条件进行反应: 37°C 60min 95°C 5min 3. 获得cDNA产物后miRNA定量检测根据机型选择步骤A或BA: 需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR仪，包括：ABI PRISM7000/7700/7900HT, 7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P (Stratagene)等。按照如下组分配制20 μl PCR反应体系： 终浓度 5×Golden HS SYBR Green qPCR Mix 4 μl 1× 50×ROX Reference Dye 0.4 μl 1× PCR Forward Primer(20×) 1 μl 1× PCR Reverse Primer(20×) 1 μl 1× cDNA模板 1～2.5 μl ddH2O Up to 20 μl B:无需添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real- Time PCR仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)；MiniOpticon、Opticon2、MyiQ 2、CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。按照如下组分配制20μl PCR反应体