激光共聚焦显微镜样品制备方法_一_细胞培养样品.pdfVIP

29 2 电 子 显 微 学 报 Vol-29 ，No. 2 第 卷第 期 20 10 4 20 10 -04 年 月 Journal of Chinese Electron Microscopy Society 文章编号:1000 -628 1 (20 10 )02 -0 185 -04 ( ) 激光共聚焦显微镜样品制备方法 一 ——— 细胞培养样品 余礼厚 ( ， 20003 1) 中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 上海 : ， 摘 要 随着激光共聚焦显微镜在生物学研究中的广泛应用 绿色荧光融合蛋白能够提供蛋白质在细胞体内的精 。 。 确时空信息 因此免疫荧光样品的制备也成为基本的细胞生物学实验方法 本文主要介绍在培养细胞中表达绿 色荧光融合蛋白及免疫荧光样品的制备过程。 : ; ; ; 关键词 绿色荧光蛋白 细胞培养 免疫荧光 激光共聚焦显微镜 中图分类号:Q336 文献标识码:A ［2 ］ ， 考 《 ( )》 。 随着生物学研究的不断深入 越来越多的研究 分子克隆实验指南 第三版 在设计荧光 (in vivo )， ， ， 要求在细胞体内 甚至是动物体水平上研 融合蛋白前 研究者应考虑荧光融合蛋白的用途 使 。 ， (N 、C 究蛋白质功能或动态变化 而随着检测设备的提 用何种荧光蛋白 及荧光蛋白插入的位置 端 、 ， )。 升 各种显微技术的发展和标记手段的提高 使得研 端或定位信号序列之后 、 究者能够迅速 准确地观察到蛋白质在细胞内的表 2 荧光表达载体的导入 。 达情况和定位 通过激光共聚焦显微镜观察荧光标 记细胞内的蛋白质和分子，为生物学的研究提供了 ， 将构建好的荧光表达载体进行大量扩增 并通 更直观的观测手段。因此免疫荧光样品的制备也成 ， 过质粒抽提试剂盒大量纯化 得到不含有内毒素的 。 。