靶向瘦素基因小干扰RNA抑制肝星状细胞增殖和细胞内钙离子浓度.pdfVIP

第 43卷第 6期第 631页 华 中科技大学学报 (医学版) Vo1．43 No．6 P．631 2014年 12月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhong Dec． 2014 靶向瘦素基因小干扰 RNA抑制肝星状细胞 增殖和细胞 内钙离子浓度* 薛秀兰 ， 林菊生 厦门大学附属第一医院感染科 ，厦门 361000 。华中科技大学 同济医学院附属 同济医院肝病研究所 ，武汉 430030 摘要 ：目的 探讨靶 向瘦素 (1eptin)基 因的小干扰 RNA(smallinterferingRNA，siRNA)对 leptin表达 ，肝星状细胞 (hepaticstellatecell，HSC)的增殖、凋亡及细胞 内钙离子浓度 (intracellularCa concentration，lea ]。)的影响，为肝纤 维化基 因治疗提供可行的方案。方法 HSC分为 4组 ：正常对照组、空载体组、siRNA对照组、leptinsiRNA组 。依分组 要求分别转染 HSC后 ，采用 MTT法和流式细胞技术检测各组细胞 的凋亡和增殖 ；应用免疫细胞化学 SP法、Western blot法检测 leptin蛋 白的表达 ；Fura一2／AM负载检测 [Ca ]变化。结果 与 HSC的正常对照组、空载体组及 siRNA对 照组相 比，leptin—siRNA组可 以有效抑制 leptin基 因的表达和细胞增殖 (PO．05)，且不 同时段 (24、48、72h)细胞抑制率 之间有显著差异 (P0．05)。leptin—siRNA组细胞凋亡 比例 明显增加 (P0．01)；ECa ]，显著降低 (P0．05)。结论 leptin—siRNA可以通过沉默 leptin基 因表达而抑制 HSC的增殖、促进凋亡和减少ECa ]，。leptin在肝纤维化发展 中起 着重要作用 ，有望成为肝纤维化一个新的预测和预后 的标志。 关键词 ：瘦素 ； 小干扰 RNA； 细胞凋亡 ； 肝星状细胞 ； 细胞 内钙离子浓度 中图分类号 ：R329．2 D0I：1O．3870／j．issn．1672—0741．2014．06．004 InhibitionofHepaticStellateCellProliferationandExtracellular Ca+InfluxbyLeptin—siRNA XueXiulan ，LinJusheng DepartmentofInfectiousDisease，AffiliatedHospitalofUniversity ofXiamen，Xiamen361000，China 。InstituteofLiverDisease，TongJiHospital，TongJiMedicalCollege，HuazhongUniversity ofScienceandTechnology，Wuhan430030，China Abstract Objective ToevaluatetheeffectofsilencingleptinbysmallinterferingRNA(siRNA)ontheexpressionoflep— tin，andapoptosis，proliferationandintracellularCa concentration(ICa l，)ofhepaticstellatecells(HSCs)andtoprovideevi— denceforliverfibrosisgenetherapy．M ethods HSCswered