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细菌DNA提取试剂盒 Bacterial DNAout 货号: M09007产品及特点 DNA纯净，OD260/280一般都在1.9左右可直接用于PCR、酶切、杂交等。DNA产量20 ug/mL饱和菌液（108-109个细胞）。 操作简单，整个过程约15分钟处理0.1-1.5 mL细菌。 价廉物美，与国外同类产品相比质量相当，但价格便宜。 安全无毒，本试剂盒对人体无害，无腐蚀性和刺激性气味。 规格及成分 溶菌酶 600 mg 溶液A 30 mL 溶液B 7.5 mL RNase A溶液 使用手册 1份 运输及保存 常温运输，4℃保存。 使用方法 溶液A溶液溶液℃预热使沉淀溶解、粘稠度降低，用前充分摇匀。 一: 对革氏阴性细菌样品 将 mL过夜培养的菌液转移到1.5 mL塑料离心管中， 12000-15000 g室温离心1分钟沉淀细菌，弃上清。 加溶液A溶液溶液 mg。也可以将1 mL 枪头剪去一截再吸取。也可以同时加入15 uL的RNase A溶液。 65℃放置3-5分钟。如果室温放置，DNA产量会降低10-20%。 加入200 uL自备氯仿，震荡混匀10-30秒，此时溶液将呈乳白色。 12000-15000 g室温离心2分钟。此时上清液将变得透明，中间层有白膜。小心转移上清液到一个新的1.5 mL塑料离心管中，避免触及中间层的白膜。 加入1倍体积(约750 uL)的异丙醇到上清液中，用手上下颠倒30秒混匀。此时一般将有絮状DNA沉淀出现。 12000-15000 g室温离心3分钟。此时管底将有微小DNA沉淀，小心弃上清，注意不要丟弃DNA沉淀。 在离心管中加1 mL 75%乙醇，短暂震荡，12000-15000 g室温离心3分钟，弃上清。 重复上述操作一次。 短暂离心，小心吸弃残留的液体（约50 μL）。此步不要省略，否则残留的液体（含乙醇）将会影响DNA电泳、酶切很PCR等反应。 立即加入50-100 μL TE缓冲液充分溶解DNA沉淀。注意：由于基因组DNA较长并在沉淀时形成紧密复合物，充分溶解的时间远长于质粒DNA或PCR片段，有时需要长达数小时。如果在第3步没有加RNase A溶液，或虽然加了但还担心有残留的RNA污染，可以在此时补加5-10 uL 的RNase A溶液，保温30分钟。 直接取5-10 uL电泳检测DNA，其余放冰箱备用。 二: 对革氏阳性细菌样品 将0.1-1.5 mL过夜培养的细菌离心1分钟于0.6 m溶菌中溶菌mL超纯水+600 mg溶菌酶)，颠倒混匀5-10次37℃保温至少30分钟(有的菌种可能需更长时间)。 12000-15000 g室温离心10分钟，uL TE溶解。 背景资料 G+和G-细菌细胞壁比较 细胞壁特性 革氏阴性菌 革氏阳性菌 厚度 10 nm 20-80 nm 细胞膜层数 2 1 肽聚糖（Peptidoglycan）含量 10-20% 50% 磷壁酸（Teichoic acid） 无 有 脂及脂蛋白含量 58% 0-3% 蛋白含量 9% 0% 脂多糖（Lipopolysaccharide）含量 13% 0 对青霉素敏感性 低 高 对溶菌酶（Lysozyme）敏感性 低 高 技术咨询电话：400-607-9999 注意：本制品仅供研究使用，请勿用于临床治疗等其他用途