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福建农林大学植物保护学院
生物技术制药工艺学实验报告
姓 名:郑晓娟
学 号:102251002007
成 绩:
指导老师:陈宇熹
1 实验目的与意义
2 实验内容
2.2.1.1全自动机械搅拌不锈钢种子罐原理
种子罐可以提供菌体生长、繁殖提供所需的一系列营养物质以及温和的环境条件,使菌种得到良好的繁殖,获得足够数量的菌体,以便接种到发酵罐中。
一般来说,种子罐的培养基原则上采用易被菌利用的成分如葡萄糖、玉米浆、磷酸盐等,如果是需氧菌,同时还需供给足够的无菌空气,并不断搅拌,使菌(丝)体在培养液中均匀分布,获得相同的培养条件。种子罐的作用主要是使孢子发芽,生长繁殖成菌(丝)体,接入发酵罐能迅速生长,达到一定的菌体量,以利于产物的合成。
在生产中大多采用的补料方式为半连续补料,所以要格外注意空气入口、取样口和罐口的灭菌。
2.1.2全自动机械搅拌不锈钢种子罐工艺流程图
见附图1
2.1.3全自动机械搅拌不锈钢种子罐工艺操作过程
一、空气过滤器的消毒
1.空气过滤器的消毒:首先检查阀门A12、A16、S12是否已经关闭,然后打开S1、S2,待排出的蒸汽在管路凝结成冰后,将S2转为微开。调节S1,使蒸汽过滤器上方压力表指示在0.13~0.14MPa之间。随后,缓慢打开阀门S11,微开A13,打开A14,慢慢打开阀门A15,使少量蒸汽流出。调节阀门S11,保证空气过滤器上方压力表显示压力为0.11~0.12MPa之间。过滤器消毒时间一般为30~50min。到时间后关闭阀门A15、A13、S11、S2、S1。
2.吹干空气过滤器:打开阀门A2,排出凝结水后A2转为微开。之后打开阀门A11、A12,微开A13。缓慢打开阀门A15,控制空气流量计读书在0.3VVM左右,吹干空气过滤器,时间15~20min。这个过程结束后依次关闭阀门A15、A13,使空气管路内保持正压。
二、空消
1.拧好罐盖螺栓。将接种口、补料口、电极插孔堵塞等紧固。
2.首先检查W11、W13、W14、H12、H14、D12是否已经关闭,然后打开阀门D11、S13,排出夹套中残留冷却水后关闭阀门S13。
3.打开罐顶上面的放气阀A17,拔下尾气冷凝器两端软管,放出其里面的水。关闭阀门A14,打开S12,打开A15,排出管路凝结水后A15转为微开。稍开A16,通过进气管向罐中通蒸汽。检查阀门P1是否关闭,打开阀门S14、P12,排出蒸汽管路冷凝水后P12转为微开,打开P11使蒸汽通过放料管进入罐内。观察压力表Y11,通过调节阀门P11、A16、A17的开度,使罐压稳定在0.11~0.12MPa之间。空消一般需要30~50min。
4.计时结束后,关闭阀门A15、A16、S12,再打开A14,再稍开A16向罐内通气。关闭S14、P12,再慢慢打开P12,排尽罐内的冷凝水后关闭P11、P12。降温过程中应注意观察罐顶出气口压力表Y11,要适时启闭A16向罐内通空气,师罐压维持在0.03~0.05MPa之间。
三、实消
1.关闭空气进罐阀门A16,开打罐顶放气阀A17,卸去罐内压力。取出电极安装孔内的孔塞,此时罐内必须没有压力。将标定好的pH、DO电极安装到罐体电极插孔内,用螺母固定好后与控制系统相连。
2.按工艺要求配制培养基母液。关闭阀门P11、P12,将配好的培养基母液加入罐内,补水,开启机封冷却系统,开启控制系统电源。
3.升温:打开阀门S13(注意不要超过夹套最大工作压力),将夹套内剩余的水排空,并对发酵液进行预热。此时可低速搅拌发酵液,促进热传递,当温度达到80℃以上时,应该停止搅拌。进行下述操作:
⑴检查阀门P1是否已经完全闭合,打开阀门S14、P12,待排出凝结水后P12转为微开。稍开P11,向罐内部通蒸汽加速升温。
⑵关闭A14,打开阀门S12,微开A15,使其有少量蒸汽流出。稍开A16向罐内通蒸汽,并对空气进罐管路灭菌。
4.罐温到达灭菌温度后,适当关小P11、A16的开度。控制阀门S13、D11、A17,使罐压保持在0.11~0.12MPa之间。实消一般在30~40min。
5.计时结束后,关闭S13。关闭P11、P12、S14。关闭A16、A15、S12。打开A14,开始自然降温减压。降温过程须适时打开A16,向罐内通空气,保持罐压在0.03MPa~0.05MPa之间。自然冷却10min左右后,可向夹套通循环水加速冷却,操作如下:关闭D11,打开W12、W13、W14。调整控制系统的温度设定值,将控制仪设置为“运行”状态,并设置“加热”、“冷却”为自动,进入自动控制降温状态。同时可打开搅拌,加快冷却速度。
6.打开阀门W2,在控制系统设置水箱温度进行水箱预热。
四、移种
当培养液温度降到接种温度时即可进行接种。
1.将无污染的摇瓶种子在超净工作台上
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