药物制备中酸水解乳果糖的测定.doc

药物制备中酸水解乳果糖测定本文介绍一种利用简单、准确的分光光度法来测定药物制备中的乳果糖。这种方法是基于乳果糖的酸水解，不使用酶，而通过乳果糖的酸水解，它的准确度和精确度高，并且不干扰药物制备中的赋形剂，适于药物制备。??? 乳果糖浓缩液U．S．P．(4-O-B-D-半乳吡喃糖基D-果糖)是一种糖溶液，其主要成分是乳果糖，还含有少量的乳糖和半乳糖，以及极少量的其他糖类和水[1]。乳果糖是由一个分子半乳糖和一个分子果糖组成的二糖，可通过乳糖在石灰水中发生差向异构作用而生成。乳糖也是一种二糖，由一个分子半乳糖和一个分子葡萄糖组成。商品化的乳果糖糖浆是淡黄色至深黄色、粘稠的甜味液体。乳果糖可溶于水，微溶于乙醇[2]。 　　乳果糖在各个领域中的重要应用说明在生物流体、制药和奶制品中需要更简单可靠的定量检测方法。目前已报道的方法主要有以下几种：酶水解后的分光光度测定[4]、能做流体分析的自动酶反应器[3]、酶制备电极[6]和酶电化学生物传感器[7]。其他技术主要是色谱方法，如高效阴离子交换色谱法[5]、具有电化学检测功能的HPLC法[8]以及气-液色谱法[9，10]。上述方法都存在耗时长、应用困难和价格很高等缺点，并且大多数报道的分析方法仅应用于奶制品中乳果糖的分析。乳果糖可应用于医药和食品工艺。它被用于婴儿药方，以及用于慢性便秘、门静脉系统脑病和其他肠和肝脏系统紊乱的预防和治疗[3]。牛奶在加热过程中会产生乳果糖，因此国际奶制品联合会和欧洲委员会把乳果糖含量作为一种分析参数来区分容器消毒奶和超高温(UHT)奶[4]。临床上，把服用不代谢糖后尿中乳果糖与甘露醇的比例用来衡量一些传染性和营养性疾病的吸收不良和肠道渗透失调[5]。 　　 1实验部分 1.1仪器 　　紫外可见分光光度仪和分析天平温度的影响通过恒温水浴装置来确定。 1.2化学药品和试剂 　　所有药品均为分析纯：　　(1)硫酸(6N)：将40．8mL浓硫酸用250mL蒸馏水稀释后制得6N硫酸(Merck KGaA，Darmstadt，Germany)。 　　(2)乳果糖标准溶液：乳果糖标准储备液(5000μg／mL)用蒸馏水配制。1000μg／mL和最终使用的500μg／mL乳果糖标准溶液均用蒸馏水稀释储备液后制备。 　　(3)乳果糖样品溶液的制备：乳果糖样品溶液(500μg／mL) 由Disec糖浆(Ubra p『ivate Ltd．，N．W．F．P， Pakistan)、Floralac糖浆(Platinum Pharmaceutical private Ltd.,Karachi,Pakistan)和Lilac糖浆 (GETZ Pharma private Ltd.,Karachi，Pakistan)溶于蒸馏水制得。2实验过程 　　校正曲线测定过程如下：在带有玻璃塞的烧瓶中加入10ml的6N硫酸，然后加入乳果糖标准溶液(5?25μg／ml乳果糖)。将烧瓶放入沸水浴中加热70min，待溶液冷却后用蒸馏水稀释至100mL。采用1cm石英池在波长284nm处测定吸光度。采用同样的方法测定空白和药物制备中的乳果糖。 　　为了验证该方法的重复性，测定了乳果糖的回收率。将已知标样加入到一个已测定的乳果糖样品中。强化药品中通常含有7．5?12．5μg／mL的标准品。 3结果与讨论 　　测定乳果糖时，假定在药物合成中该化合物是果糖的唯一来源，而果糖只能通过乳果糖的水解产生［2］(图1)。二糖可通过酸水解的方法变成单糖。对乳糖来说，水解产生的单糖主要是葡萄糖和半乳糖，而乳果糖水解生成的是果糖和半乳糖[11］。乳果糖在加热条件下与硫酸反应，水解成果糖和半乳糖，然后在分子内重组，生成一种具有紫外吸收的化合物。产物在284nm处具有最大吸收(图2)，分光光度法测定乳果糖非常有用。在乳果糖的测定中，需要优化不同的参数。 ? ? 3.1酸度对乳果糖水解的影响 　　硫酸浓度在1?6N范围内，吸光度随着硫酸浓度的增大而增大。当硫酸浓度超过6N时，吸光度不再变化。如图3所示。其他一些无机酸的测试结果并不理想。在5?20mL范围内研究了硫酸体积对吸光度的影响，结果表明在10?20mL范围内都具有恒定的吸收值。因此，我们最终使用10mL 6N的硫酸用来催化乳果糖的水解(图4)。 ? 3.2加热时间对乳果糖酸水解的影响 　　当水解温度为100℃时，在30?90min内研究了水解时间对乳果糖的酸水解的影响，实验结果见图5。当加热时间为70min时，水解产物浓度达到最大值。 3.3分析数据 　　在0.5-25μg／mL的质量浓度范围内，乳果糖酸水解符合比尔定律(图6)。水解产物的摩尔吸光度为5.3x104L／mol／1cm。0.5μg／mL乳果糖的标准偏差和吸光度的变化系数分别为0.05和5.37％，检测