第14章+细胞工程及作物育种.pptVIP

第十四章 细胞工程与作物育种 1、目的要求：了解植物离体培养的概念、类型及育种应用；初步掌握植物离体培养技术。了解植物原生质体培养与体细胞杂交的基本过程。 2、讲授内容： 一、细胞工程概述 二、植物离体培养技术 三、植物原生质体培养与体细胞杂交 一、细胞工程概述 （一）细胞工程的定义：以细胞为基本单位，在离体条件下进行培养、繁殖或按照人们的意愿改造细胞的某些生物学特性，以改良作物品种和创造新种质，或加速繁育植物群体或获得其它有经济价值的生物产品的过程。 （二）主要内容：是现代生物技术的重要组成部分。包括： 植物组织培养 植物细胞培养 花药及花粉培养 离体胚培养 原生质体培养 细胞器移植 等等。 每一种都还可以继续细分为不同小类。 以上内容可归为两部分 上游工程：细胞培养、细胞遗传转化体系建立。 下游工程：细胞工程实践应用。 （三）理论基础 植物细胞全能性（ cell Totipotency ）:每个植物细胞具有发育成为完整植株的潜能。 （四）育种应用 1、微体快繁 植物组织（块）→人工培养→再生成苗 →大量繁殖。 营养植物、经济作物，如花卉、香蕉、咖啡、 中药材品种快繁。 　荷兰、以色列 ：花卉 2、脱毒 染病毒植物中，茎尖分生组织病毒的分布最少或没有。 草莓 、香蕉、甘薯、马铃薯等60多种作物。 3、细胞融合（体细胞杂交） 克服不同物种有性杂交困难 马铃薯与番茄的细胞融合成功获得植株. 2个抗病毒马铃薯野生种（2n=2x=24) ，不能有性杂交，通过细胞融合，获得抗病毒马铃薯（2n=4x=48) 。 4、体细胞无性系变异筛选 基础：生物个体生长发育过程中，体细胞基因突变和 染色体重组产生体细胞变异　　 方法：有利的体细胞变异→（定向）筛选 →培养成苗→培育优良品种 应用：日本粳稻品种→胚培养→早熟、 优质、高 产的 粳稻品种在东北大积推广应用。 水稻幼胚→毒素培养基（含病原菌的粗毒素） →愈伤组织化成苗→经过抗性鉴定 →抗稻瘟病品系 5、胚拯救 远缘杂交早期胚胎发育到一定时间就停止发育、死亡、夭折。 远缘杂种幼胚→离体组织培养→发育正常植株。 6、花药（花粉）培养 杂交后代分离，遗传纯合稳定慢，育种周期长。 花粉（花药）→单倍体（n）→二倍体(2n)。 遗传迅速纯合，育种周期极大缩短。 Hs-1、Hs-2、Hs-3系列光敏不育系；花1A。 培矮64s花培纯化，解决育性转换临界温度漂移。 十字花科蔬菜的自交不亲和系培育。 “中花8号”水稻，“京花3号”小麦，等 7、创制人工种子 人工种皮+胚状体（不定芽、顶芽、腋芽） 8、种质试管保存 9、转基因受体 二、植物离体培养技术 （一）概念 1、植物离体培养（In vitro culture） 植物外植体在无菌条件下进行人工培养，并使之发育成完整植株的技术总称，也称植物组织培养（Plant tissue culture）。 2、外植体（explant） 从植物体分离下来进行培养的器官、组织或细胞等。 3、初代培养（Primary culture） 指外植体的最初培养。 4、继代培养（Subculture） 将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中再培养（一次或多次移植培养）。 （二）实验室基本设施 洗涤室 灭菌室 配制室 无菌操作室 培养室（暗、光） (三)培养条件 1、培养基 （1）种类： 固体培养基 液体培养基 （2）基本培养基 MS、B5、 White、 N6等 P237 表15-1 （3）培养基的成分 无机营养：大量元素：N、P、K、S、Ca、Mg 微量元素：Fe、Mn、Cu等 有机营养： 碳源：蔗糖、葡萄糖、果糖、麦芽糖 氮源：氨基酸类、酰胺类 活性物质：烟酸、肌醇、生物素等 植物激素：生长素类：IAA、NAA、IBA等 细胞分裂素类：激动素、玉米素等 其它：赤霉素、脱落酸、乙烯 附加物： 琼脂、椰乳、水解蛋白等 2、无菌操作 （1）污染源 培养基及玻璃器皿 无菌操作室、器械 外植体 （2）消毒 器皿消毒 材料（外植体）消毒 外植体消毒 培养基灭菌 高压蒸汽灭菌 过滤灭菌 接种过程消毒 接种室（无菌操作室）的灭菌 接种台的灭菌 工