乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白4基因剪切体HBeBP4A的克隆与原核表达.pdfVIP

·348· 生亘医缱金旦王痘鍪壹呈塑!生箍12鲞筮垒翅 ·基础理论研究- 乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白4基因剪切体 HBeBP4A的克隆与原核表达+ 张健康1 郭 江2 成 军2 伦永志2 王丹琼2 赵龙凤1 蓝贤勇2 洪 源2 毛羽2 1．山西医科大学第一医院消化内科(山西太原，030001)；2．北京地坛医院传染病研究所 摘要 目的：克隆乙型肝炎病毒e抗原结合蛋白未知功能新基因HBeBP4的剪切体基因HBeBP4A，构建其原核 行TA克隆，通过PcR、限制性酶切分析及测序进行鉴定，再将其亚克隆到原核表达栽体pET-32a(+)中，转化进 (sDS．PAGE)分析，考马斯亮蓝染色，以抗一His的单克隆抗体进行westemblotting免疫印迹分析鉴定证实表达蛋白的 (DE3)受体茵转化、I胛G诱导、sDs分析获得了HBeBP4A重组蛋白的表达，westemblotting证实了重组蛋白 表达。 关键词e抗原；结合蛋白；剪切体；生物信息学；基因克隆；原核表达 and of 4 Variant Cloningprokaryoticexpressionbindingproteinspliced HBeBP4Aof BViruse hepatitis antigen zHA蕊G H J泌R∥，CHE魏GJ耐，￡t文，乳F泌t s池趟， Ji衙{c虢“GUo osp_喊《sk蜮Medic文U赢ers磅(‰邺R 030001)Chin也 T0 anew Abst豫ct clone 4 v捌锄tHBeBP4Aof Bvilllse Objective： gene，bindingproteinspliced hepatitis antigen， andconstructit8recombinant inducethe ofrecombinantin正kck廊^如co纪 pmkaryoticexpressionvector，and expression pmtein Reverse chainreaction andbioinfb珊atic wereused Methods： tr肌scription—p01ymer嬲e(RT·PCR) techniqIle to锄pl坶 HBeBP4A饷mcDNA novelDNA was into vectorTA HepG2template．ne fragrnentligatedpGEM-Teasycloning by cloning． After withrestrictiveand thecorrectDNA wasinsertedimoinducible ex— digestion enzymesequencing， fragment proeukaryotic vector BL21 cD肛was andthenculturedandinducedwith competent(DE3)EtraIlsfo珊ed， pressionpET-32a(+)．7111e I胛G．The HBeBP4Awas aIldco血珊edwithsodium a11alyzed