家蚕cDNA文库构建及大规模EST测序.pdfVIP

2003；29(4) 335 家蚕cDNA文库构建及大规模EST测序 程道军 夏庆友 周泽扬 鲁成 向仲怀 (西南农业大学蚕学与生物技术学院，农业部蚕桑学重点开放实验室，重庆400716) 摘要EST(expressedflequencetag，表达序列标签)测序分析技术广泛应用于基因功能和表达模式的分析研究。以 家蚕品种“大造”为材料。采用非均一化的。蛔o-dr引物定向克隆技术构建了13个组织的cDNA文库，进行了cDNA 260个 克隆5’端测序，共获得84791万条lEST序列，初步拼接得到27693个非重复序列，其中包括10433个Contigs，17 Singletons。家蚕大规模EST测序将为家蚕功能基因组研究和全基因组测序计划的实施奠定基础。 关键词家蚕EST测序生物信息学 中圈分类号$881．2 文献标识码A 文章编号0257—4799(2003)04—0335一c15 构建生物各种器官、组织、细胞或病理组织cD． 基因得以表达的发育期胚胎等(表1)。 NA文库，并大规模随机选取cDNA克隆进行表达序 表1家蚕eDNA文库构建采用的组织和器官 列标签(Exp蒯暇畔tag，EsI’)测序分析，将直 of Table1 Thetissuesand theconstructionsilkworm m舯for 接发现在某个重要生理过程或疾病中具重要功能的 cDNAlibraries 新基因或后选基因，获得基因组中与生物学、医学和 性别 生物制药等关系最密切的信息，以此了解其基因表 毯训一鎏岫盟姆 Sex 达谱[1．3|。目前国内外相继开展了人、果蝇、老鼠、 水稻、拟南芥等物种的F_．ST计划【4“J。我们有目的 的选择家蚕重要的13种不同发育阶段的不同组织 器官，应用非均一化的oligo-dT引物定向克隆技术 分别构建其cDNA文库，再对每个文库开展大规模 F．sr测序分析，以期发现与家蚕性别调控、变态、胚 胎发育、能量代谢和物质代谢等密切相关的基因信 息，并对基因表达的组织特异性和发育特异性进行 分析。 1材料与方法 1．1材料 本研究采用的家蚕品种为“大造”，由西南农业 大学家蚕基因库保存。组织器官重点选择5龄幼虫 期的茧丝制造器官丝腺，以及在代谢、发育过程中起 重要作用的中肠、脂肪体、体液、生殖腺，能使大多数 收疆日期-加03—04—25 资助项目：973前期项目(编号410858)；国家自然科学基金(编号 ；重庆市科委院士基金。 作者简介：程道军(1974一)．男(汉)，四川，硕士。 Tel：023F_,-tmil：chdjwl@ydtoo．oom．∞ 通讯作者：夏庆友，教授，博士生导师。 Tel：023E-mail：ximly@朗哪．cq．啪 万方数据 336 蚕业科学 2003；29(4) 1．2家蚕cDNA文库的构建 2结果与分析 分别采用％ol试剂盒(Gibeco)、Oliogtex试剂盒 2．1家蚕cDNA文库的构建 (Qiagen)、