套式pcr的建立和应用.pdfVIP

江苏农业学报(Jmn伊u，ofAgr．Sci．)，2010，26(1)：91—95 9l 逯晓敏，冯志新，刘茂军，等．猪肺炎支原体套式PCR检测方法的建立及应用[J]．江苏农业学报，2010，26(1)：9105 猪肺炎支原体套式PCR检测方法的建立及应用 逯晓敏1’2， 冯志新1， 刘茂军1， 昊叙苏1， 甘 源1， 张 映2， 邵国青1 (1．江苏省农业科学院兽医研究所，农业部动物疫病诊断与免疫重点开放实验室，国家兽用生物制品工程技术研究中心，江苏 南京210014；2．山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801) 摘要：根据GenBank中登录的猪肺炎支原体P36(L一乳酸脱氢酶)全基因序列，设计合成了2对引物，建立套 式PcR方法。运用该方法对猪肺炎支原体不同菌株培养物进行了扩增，并对经肺内免疫猪支原体肺炎活疫苗后支 气管肺泡灌洗液进行了检测。结果表明，不同菌种均能扩增出427 bp的目的条带．而其他病原菌未出现特异性扩 增条带。建立的套式PCR方法检测猪肺炎支原体的最低检测限度为10个CCU(颜色变化单位)。支气管肺泡灌 洗液检测结果表明，经肺内免疫的猪支气管肺泡灌洗液扩增结果均为阳性。 关键词：猪肺炎支原体；P36；套式PCR 中图分类号：$858．282．62文献标识码：A 文章编号2010)01-0091-05 EstablishmentofANestedPCR forDetectionof hyo— Assay Mycoplasma pneumomae LU Xiao—minl’2，FENGZhi．xinl，LIU Mao-junl，WUXu—Slll，GANYuanl，ZHANGYi《，SHAOGuo—qin91 (I．Institute Diseases and oJ。VeterinaryMed扛irw，JiangsuAcademyofAgriculturalSciences，聊LaboratoryofAnimalDiagnostic Research Scienceand Centerfor of Technology， AgricMtwe，NationalEngineering VeterinaryBio-products．Nanjing210014．China；2．CollegeofAnimal Shanxi 030801，Chitin) AgriculturalUniversity，raigu of were the of Abstract：Two to ofP36(L-lactate pairsprimersdesignedaccordingsequence dehydrogenase)gene in a PCR wasestablishedforthedetectionof nested MycoplasmahyopneumoniaepublishedGenBank，and assay M．hyopneu— moniae．Different strainsandthebronchoalveolarfluidof immunizationwithattenua—