MMP-11在胃癌患者血清中的表达及临床意义.pdfVIP

维普资讯 维普资讯 《中国癌症杂志》2007年第l7卷第12期 进行临床分期，130例中胃癌根治术后未见复发转 1．4 逆转录 (RT)-PCR 经 NucleoSpinRNAIIkit可 移病例 30例，其中Ⅱ期患者2例，Ⅲ期28例；术后 提取的外周血清游离 mRNA溶于40 lRNase．free 复发、转移病例30例；失去手术可能的晚期 胃癌 70 water，混匀，逆转体系25 l。逆转录体系中加入 例。两组病例在性别、年龄、病理类型及分化程度方 mRNA20 l，37oC反应 1h后，取2 l逆转录反应 面无显著差异(P0．05)(见表 1)。复发转移组的 液为模板进行第一轮PCR扩增，PfuMix12．5 l，上 中位 RFS时间为21个月。至 2007年 6月为止，复 下游引物各 1 l，PCR体系补水至25 l。用Mycy． 发组23例死亡病例，均死于肿瘤复发、转移。每例 cle型PCR仪进行第 1轮扩增，程序：95 变性5 患者化疗前空腹采集血清标本 1份。胃癌患者入院 min后，以94 变性45S，60oC退火45S，72oC延伸 后采不抗凝血2ml，4oC4000r／min10min(平均离 1min为 1循环，共扩增 35循环，最后 72 延伸 心半径6em，下同)，吸取上清液后，4 ，12000r／ 10min，以p-actin为内对照。第2轮扩增时加第一 min5min，血清分装后一70 贮存。取 20例正常 轮产物2 l，其余用水补充至25 l，程序：95oC变 人群血清作为对照组研究。 性 5min后 。以94 变性45S，60oC退火45S，72oC 表 1 复发与未复发组胃癌患者临床资料比较 延伸 1min为 1循环，共扩增 35循环，最后 72 Tab．1 Patientcharacteristicsinthegroupsofpatients 延伸 10min，以p—actin为内对照。同时设立水为 withandwithoutdiseaserecurrence 阴性对照。取PCR产物 5 l2％琼脂糖 电泳，用凝 胶成像仪成像光密度值，将MMP．11与p．actin光密 度比值作为MMP．11mRNA水平的相对值。 1．5 第2轮扩增 PCR 产物20 l于北京奥科生 物公司测序为MMP．11目的基因。 1．6 酶联免疫检测 MMP．11enzymeimmunoassay kit(AdhteramDiagnosticLaboratories)。所有血标本 检测两次。夹心酶联方法：100 l血清及标准品分 别加入酶标板后，加入 50 l酶标抗体37 温育60 min，加底物显色，读取450酶标仪的各孔A值。并 根据标准曲线测定患者外周血清MMP-11的准确浓 度 。 1