人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品的制备.pdfVIP

· · 中国生物制品学杂志2014 年8 月第27 卷第8 期 Chin J Biologicals August 2014 ，Vol. 27 No. 8 1042 ·诊断制剂 · 人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品的制备 王玉梅 1，李 尔华 2 ，曾灵风 2 ，刘艳 1，高尚先 1 1. 中国食品药品检定研究院体外诊断试剂室卫生部生物技术产品检定方法及其标准化重点实验室，北京 100050； 2. 中山大学达安基因股份有限公司，广东广州510665 摘要：目的 制备人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品。方法 培养人脲原体两大生物群14 个标准血清型菌株，培 养液灭活后经颜色改变单位（color change unit ，CCU）法与PCR 相结合的方法进行定值，组成能覆盖脲原体所有表型 6 CCU ／ m 4 CCU ／ m 及基因型的 14 份阳性参考品P1-P14 （浓度为10 及 14 份检测限参考品L1-L14 （浓度为10 ；选 l） l） 择6 份能排除脲原体核酸检测试剂盒非特异性或交叉反应的样品组成阴性参考品N1-N6 ；选择生物群1 的微小脲原 5 4 公司生产 体（ureaplasma parvum ，UP）1 和UP14 作为重复性参考品R1、R2 （浓度分别为10 和10 CCU ／ ml）。用5 家 的脲原体核酸检测试剂盒对参考品进行验证，确定准确性、特异性、检测限、重复性、稀释线性的性能指标；并考察参 考品在不同条件下（2 ～ 8 ℃放置7 d ，37 ℃放置3、7 、12 d，-20 ℃及常温反复冻融5 次）的稳定性。结果 支原体 6 7 间，以CCU 法测定浓度为靶值，绝对偏差均在 ± 0. 5 个 各培养液经CCU 法测定，浓度均在 10 ～ 10 CCU ／ ml 之 数量级以内。4 家公司生产的不同试剂盒检测参考品，在准确性、特异性、检测限及重复性上均符合要求；在稀释线 2 3 6 性上，最低稀释浓度为 10 CCU ／ ml 的样品只有2 家可以检出，其他几家的稀释线性相关系数以 10 ～ 10 4 个浓 度计算，r 值均 0. 990 0 ；1 家（RNA 检测）检测R2 的重复性，CV 为5. 5% 。经不同条件处理的参考品的稳定性有 轻微变化，但均处于设定的可接受范围内。结论 制备了人脲原体核酸检测试剂盒国家参考品，该参考品可满足人 脲原体核酸分型、定性及定量检