利用产气肠杆菌EAM-Z1转化合成5-氟尿苷的转化率影响因素的研究.pdfVIP

药物生物技术 32 Pharmaceutical 2005，12(1)：32～35 Biotechnology 利用产气肠杆菌删一Z1转化合成5一氟尿苷的转化率影响因素的研究 张绍谭，倪孟祥，张文婷，王 璐，魏 芳，顾 苗，吴梧桐 (中国药科大学微生物制药教研室，江苏南京210009) 摘要利用产气肠杆菌EAMzl转化合成5一氟尿苷，从筛选中间体稳定剂、底物流加、底物诱导、菌体冻 融和石英砂研磨等方面研究转化率的影响因素，结果：(1)转化过程中加入40mmoI／I。的硼砂可以将转化率达到 75．56％，提高30．28％；加入10 可以将转化率提高到87．78％；(3)培养过程中加入尿苷诱导效果并不明显，尿苷浓度为o．001g／1月寸效果最佳， 提高3．63％；(4)菌体冻融和石英砂研磨使转化率下降26％。 关键词 产气肠杆菌；微生物转化；5一氟尿苷；转化率；嘧啶核苷磷酸化酶 中图分类号：R979．1 文献标识码：A 文章编号：1005—8915(2005)o卜0032一04 5一氟尿苷(FUR)是脱氧氟尿苷(DFUR)重要 的合成中问体。DFUR是一种良好的抗代谢类抗化应用前景[2’5]。 肿瘤药物，在肿瘤细胞内受肿瘤组织中嘧啶核苷磷 中间体核糖一l一磷酸很不稳定，在通常的反应 酸化酶的作用而转化为真正起作用的5一氟尿嘧啶 条件下容易分解[6叫0|，影响转化率。国外曾经有 (FU)，同时因肿瘤组织细胞中嘧啶核苷磷酸化酶人分离核糖一1一磷酸[11|，但是还未见有筛选中间体 的含量比正常细胞高很多，可以作为细胞癌变的检 稳定剂提高转化率的报道，国内也未见有中间体核 测指标，所以DFUR具有与之相似的作用途径和 0|， 糖一1一磷酸方面的研究报道。根据文献报道[6~1 抗肿瘤谱，且毒副作用小。 核糖一1一磷酸可以同一些化合物形成稳定的盐，因 实验利用的产气肠杆菌(EAM_Z1)的嘧啶核 此可以通过筛选中间体稳定剂来提高转化率。有 苷磷酸化酶为胞内酶，其转化合成核苷类药物的反 人报道向反应体系中流加底物尿苷，但是效果并不 应式如下： 核苷1+嘧啶1寺等≥核苷2+嘧啶2核苷1+嘧啶1≤警核苷2+嘧啶2 理想[12|。本实验研究5一氟尿苷的微生物转化工艺 过程以及对转化率的影响因素，通过筛选中间体稳 ryl、rase 定剂来提高转化率，并向反应体系中流加底物 当核苷1为尿苷、嘧啶1为5一氟尿嘧啶时即可 5一FU使反应平衡向右移，从而提高转化率；另外， 转化合成5一氟尿苷。转化反应是由以下两步反应 组成的： 初步探索了在培养过程中加入底物尿苷对酶活的 核苷1+Pi爿核糖一1一磷酸+嘧啶2； 影响，并通过石英砂研磨研究荚膜对转化率的影 核糖一1磷酸+嘧啶1—一核苷2+Pi[-3 响，为核苷类抗肿瘤、抗病毒药物或药物前体的微 生物转化合成平台的建立提供基础，并为工业化生 EAM—Zl含有活力较高的嘧啶核苷磷酸化 酶，并且该酶作用的底物特异性不强，可以用来建 产抗肿瘤、抗病毒药物奠定基础，具有重要的应用 立一个核苷类抗癌、抗病毒药物或药物前体的微生 价值。