细胞工程学复习.doc

一、玻璃仪器的清洗 浸泡： 购进的玻璃器皿常带有灰尘，呈弱碱性，或带有铅、砷等有害物质，故先用自来水浸泡过夜、水洗，然后再用2%-5%盐酸浸泡过夜或煮沸30分钟，水洗 2、刷洗： 用软毛刷、优质洗涤剂，刷去器皿上的杂种冲洗晾干 浸酸： 将器皿浸泡于清洁液中24h，如急用也不得小于4h。清洁液由重铬酸钾、浓硫酸及蒸馏水配制而成。有很强的氧化作用，去污能力很强。经清洁液浸泡后，玻璃器皿残留的未刷洗的微量杂质可被完全清除。 冲洗： 先用自来水充分冲洗，吸管等冲洗10min；器皿需每瓶灌满倒掉，反复10次以上，然后再经蒸馏水漂洗3次，不留死角，晾干或烘干备用。 二、培养基种类主要有，物理灭菌法，化学灭菌法和抗生素灭菌法。 1、 物理灭菌法： 蒸汽灭菌 用于玻璃制品、滤器、橡胶塞、解剖用具、受热不变性的溶液等，不同物品的有效灭菌的压力和时间不同，如培养液，橡胶制品、塑料器皿等〔68kPA(115 ℃,10min〕；布类、玻璃制品、金属器械等〔103kPA(121 ℃,15min〕 优点：消毒效果好，时间短 缺点：需专人看管，不能离开人，应随时注意压力变化。 2、过滤除菌： 此方法适用于大多数细胞培养用液，如培养液、消化液、Hanks液、血清以及其他不能用高压蒸汽消毒的液体，用0.22um的微孔滤膜可除去细菌和霉菌。 3、紫外线灭菌： 紫外线的波长为200－300nm，最强为254nm，6－15平方米最少一只紫外灯，高度2.5m以下，湿度为45％－60％，杆菌效果好，球菌次之，霉菌最差，实验前应不低于30分种的照射时间。 优点：消毒效果好，面积大，使用方便 缺点；产生臭氧，气味难闻 4、熏蒸灭菌 适用于无菌室等房间的消毒，高锰酸钾5－7g，加甲醛（40％）10－15ml，，混合放入一开放容器中，立即可见白色甲醛烟雾，消毒房间需封闭24小时，至少4小时以上 。 5、煮沸消毒 金属器械和胶塞在水中煮沸20－30分钟，趁热倒去水分即可使用。紧急情况时使用。 化学消毒 化学药品消毒法是应用能杀死微生物的化学制品进行消毒灭菌的方法。实验室地面，桌面，用具及洗手用的溶液均常用化学药品进行消毒。 2％煤酚皂溶液（来苏儿） 0.25％新洁尔灭 1％升汞 3－5甲醛溶液 75％酒精 请链霉素（双抗） 1、配制：青霉素100万U及链霉素1克溶于无菌水三蒸水100ml每毫升含青霉素10000U链霉素10000ug。 2、保存：分装小瓶，-20度冰冻保存。 3、使用：99ml培养液中加入青、链霉素混合液1ml，最终浓度青霉素为100U\ml，链霉素为10ug\ml。 三、培养基种类 天然培养基、合成培养基、无血清培养基 天然培养基：包括血清、组织提取液等 四、细胞培养 1、细胞工程的优点： 研究的对象是活细胞 研究条件可以人为控制 研究的样本可以达到比较均一性 研究内容便于观察、检测和记录 研究的范围比较广泛 研究的费用相对较经济 2、细胞工程的缺点： 现在人工模拟体内环境技术已经很高，但人工模拟的条件与体内实际情况仍不完全相同。 当细胞被置于体外培养后，生活在缺乏动态平衡的环境中，久了，必然发生变化。 因此，对于体外培养的细胞，应该把他们视作一种既能保持动物体内原细胞一定的性状、结构和功能又具有某些改变的特定的细胞群体，而不能将之与体内的细胞完全等同。 2、细胞培养养的意义： 1、在生物技术上：生产各种生物技术产品如：狂犬病、小儿麻痹症等病毒疫苗，表皮生长因子及干扰素、白细胞介素等生长因子及单克隆抗体等。 2、科学研究上：在病毒学、免疫学、遗传学、肿瘤学等方面。 3、临床医学上：胎儿的遗传性疾病分析，药物筛选及某些疾病的治疗等。 五、外细胞的差异 培养细胞最多见的表现是：失去原有组织结构和细胞形态，分化减弱或不显，出现类似“反祖“现象:表现为细胞趋单一化，或获得不死性，或变成具有恶性性状的细胞群。 与体内主要不同：相对孤立、相对单一，缺乏体内的系统作用，失去神经体液的调节和细胞相互间的影响。 体外细胞培养物的生长类型：1、按生长方式分为：粘附型细胞和悬浮型细胞 根据形态大致的不同分为：上皮细胞型和成纤维细胞型 六、细胞生长： 1、培养细胞生长的特点：贴附、接触抑制、密度抑制 1、组织培养细胞生命期：是指细胞在培养中持续增值和生长的时间。包括原代培养期、传代培养期及衰退期。 潜伏期，指数增生期，停滞期 原代培养期特点：细胞呈活跃移动，可见细胞分裂，但不旺盛。与体内原组织在形态结构功能活动上相似性大。贴身运输：选择生长状态良好的细胞，液量要达到培养瓶颈部，保留微量空气，适合四五天内到达目的地的，到达之后要倒出大部分培养液，置 仙台病毒法： 九、常用的杂种细胞筛选方法：