蛋白质的两性解离和等电点测定.pptVIP

实验三 蛋白质的两性解离和等电点测定 一、实验目的 了解蛋白质的两性解离性质。 学习测定蛋白质等电点的一种方法。 2、实验原理 蛋白质由许多氨基酸组成，虽然绝大多数氨基与羧基成肽键结合，但是总有一定数量自由氨基与羧基，以及酚基、巯基、胍基、咪唑基等酸碱基团，因此蛋白质和氨基酸一样是两性电解质。 调节溶液的酸碱度达到一定的氢离子浓度时，蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等，以兼性离子状态存在，在电场内该蛋白质分子既不向阴极移动，也不向阳极移动，这时溶液的pH值，称为该蛋白质的等电点（pI）。当溶液pH低于蛋白质等电点时，即在H+较多的条件下，蛋白质分子带正电荷成为阳离子；当溶液pH大于等电点时，即在OH—较多的条件下，蛋白质分子带负电荷，成为阴离子。 蛋白质溶液的pH在等电点时，蛋白质的溶解度、粘度、渗透压、膨胀性及导电能力均最小，胶体溶液呈最不稳定状态。 凡碱性氨基酸含量较多的蛋白质，等电点往往偏碱，如组蛋白和精蛋白。反之，含酸性氨基酸较多的蛋白质如酪蛋白、胃蛋白酶等，其等电点往往偏酸。 不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。 3、实验材料 水浴锅、温度计、200mL锥形瓶、100mL容量瓶、乳钵（准备实验用具） 4、操作步骤 （1）取同样规格的试管4支