趋磁螺菌优化培养及其纳米磁小体应用基础研究.pdfVIP

2008伞匿纳米生物‘i医学学术会议(天日潮)论文摘要集 趋磁螺菌优化培养及其纳米磁小体应用基础研究 姜伟 田杰生攀颖‘李季伦 农业生物技术国家重点实验室，中国农业大学生物学院， 北京，100193 趋磁细菌的典型特征是其细胞内可合成品型稳定、具质膜包被的纳米级磁小 体，磁小体通常为Fe3瓯或Fe3S4颗粒，可作为核酸、抗体、药物的载体，具有 免疫检测、基因发送、肿瘤靶向治疗等应用潜力。由于趋磁细菌对营养和氧气要 求苛刻，导致其人工培养困难，不易获得大量磁小体， 商业化应用难以实现。 MSR—1)为材料，主要从 gryphiswaldense 本课题组以磁蠓菊(Magnetospirillum 以下三个方面进行了探索，获得了一些初步的结果： L发酵罐恒 1．建立了在自动发酵罐中控氧深层培养磁螺菌的技术。采用42 化连续培养36小时，细胞密度可达12OD600黼，磁小体产量和生产强度为80璎酸 和53 mg／I／day，分别为目前报道的1．9倍和3．2倍。建立了批量纯化磁小体的工 艺路线和纯净磁小体的灭菌技术及保存方法。本技术的建立，不仅为这～微好氧 微生物的撬量培养提供了技术控制措旄，丽时也为进一步探讨磁小体麴成核靓律 和借助这一纳米材料而引申寻求的生物矿化机制提供了材料保障。 2．以探讨菌株铁、氧代谢机制及磁小体合成途径为目标，分别采用Tn5插 入突变等分子生物学方法，克隆获得铁吸收调控蛋自基因、铁还原酶基因、二价 铁转运蛋白基因等20余个与细胞铁代谢和磁小体合成相关的基因，在己完成部 分基因的功能鉴定及分析中，发现磁螺菌细胞内具有复杂的铁、氧代谢网络，部 分基函缺失突变后，并不麓显著影响磁小体合成，说爨其具有精细豹李}偿措麓来 调整细胞需要的铁平衡。 3．采用SPDP为连接剂将磁小体与不同抗体构建成相关复合体，．在检测随 机人血样的乙肝表面抗原和食晶中痰量沙门氏菌均获得成功，其检测限低于冒翦 常用方法的3．5倍；采用PEI桥接方法构建磁小体．核酸复合物，在细胞转染或 肌肉转染均获成功，在磁场作用下的转染效率高于脂质体；采用戊二醛将磁小体 与阿霉素构建成槌关复合体，在体蠹、体外捡溯其抗癌效果，发现该复合体对小 鼠肝癌细胞及其实体瘤、乳腺癌细胞及白m病细胞均有良好的抑瘤效果，实验证 142 2008全淹纳朱生物弓暇学学术会议(天强湖)论文摘要繁 明了在磁场作用下，该复合物具有靶向和缓释能力。 虽然通过实验拐步证鹗天然磁小体具有多种疲瘸笺潜能，健其生物安全性需 要进一步确证，特别是对其在体内的应用尚需慎重。 (2001燧】8隧l、2◇髓拢18032、 致谢：本研究得到圈“863项蠢 2006AA022233)，国家自然科学基金项目 科学基金项目(5063045)的资助。 参考文献： 1．MengXia，JiangWei，YangLei，LiYing奉，ANovelFerricReductasePurified from MSR-1，Current Magnetospirillumgryphiswaldense Microbiology，2007， 55(1)：71—75． 2．Li Wei，Sun Guili，Guan and Xiang，JiangJianbo，Wang Feng，LiYing宰，Purified sterilized from MSR-1werenot magnetosomes Magnetospirillumgryphiswaldense toxictomousefibroblasts