干扰MR1基因对肝癌细胞增殖的影响.pdfVIP

干扰MRl基因对肝癌细胞增殖的影响 边春景曾丽芬王金华王静路春华赵春华 摘要目的MRl是一种新发现的人类功能基因，与细胞重构、信号传导及细胞凋亡等 过程相关，阐明该基因在心肌肥大、肿瘤发生以及细胞信号传导通路中的作用及其机理， 将有助于肿瘤和心血管疾病的诊断与防治。本研究主要目的是研究MRl基因在肝癌细 blot 胞增殖过程中的作用及机制，为肝癌治疗提示新的靶点。方法RT—PCR和western 法检测不同肿瘤细胞和正常细胞中凇1基因的表达；采用克隆测序的方法检测肿瘤细胞 中MRl基因序列；设计并合成三条RNA干扰序列，构建到载体中，采用脂质体转染细胞， MRl RT—PCR和westernblot检测干扰效率；合成小干扰RNAsiRNA和对照MocksiRNA， 转染细胞，检测转染效率；克隆形成、生长曲线和SRB法检测肿瘤细胞的增殖；流式细 胞仪检测肿瘤细胞的周期和凋亡：westernblot检测p53和cyclinDl的表达。结果： 1RT—PCR和westernblot结果表明，MRl在肝癌细胞系BEL一7402和S姗C一7721中表达 较高，而且肝癌细胞中表达水平显著高于正常肝脏细胞L02；2对BEL一7402细胞中MRl blot 基因进行克隆、测序，结果表明肿瘤细胞中MRl基因没有突变；3RT—PCR和western 结果表明，分别针对躲1基因不同位点的三条干扰序列，其中一条具有70％左右的干扰 MRl 效率；4根据上述结果，合成小干扰RNA siRNA，转染BEL一7402细胞，RT—PCR和 western blot结果表明，MRlsiRNA显著下调了MRl基因的表达；5克隆形成、生长曲‘ 线和SRB检测结果表明，MRl基因下调显著抑制了肝癌细胞的增殖，抑制率约50％；6流 westernblot 式结果表明MRl下调导致BEL一7402细胞G1期阻滞，并促进细胞凋亡；7 D1则表达下调。结论MRl基因在肝癌 结果表明，MRl干扰后，p53表达上调，cyclin 细胞中表达较高，且高于正常肝脏细胞，MRl干扰抑制了肿瘤细胞增殖，导致G1期阻 滞和凋亡增加，可能是由于MRl干扰上调了p53的表达。综上，MRl基因与肝癌细胞增 殖相关。可能作为肝癌治疗的新靶点。 关键词肝癌细胞MRlRNA干扰p53 中图分类号R730．231R735．7文献标识码A InfluenceofMRl—RNAionthe inhuman celllineBEL一7402 proliferationhepatoma 通讯作者： 赵春华北京协和医学院基础学院组织工程中心 作者单位：北京协和医学院基础学院组织工程研究中心 地址：北京东单三条五号，邮编：100005 电话：010E—MAIL：Qb丛望n坠垦圣壁仑丛垒!i曼：圭乜主：主j：￡望