豆粕抗营养因子降解菌株的筛选、鉴定应用.pdfVIP

饲料蛋白源应用新技术研讨会 暨蛋白源大会 豆粕抗营养因子降解菌株的 筛选、鉴定及其应用 华中农业大学生命科学技术学院／梁运祥葛向阳刘萍夏俊松 摘要以大豆抗原蛋白和胰蛋白酶抑制因子等蛋白类的抗营养因子为筛选培养基的中唯一氮源，从 不同土样中分离到169株芽孢杆菌。从中得到1株对大豆1lS和7S抗原蛋白、胰蛋白抑制因子的降解能力 强的菌株B9，根据该茵的形态观察和生理生化特征，以及16SrDNA序列测定鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacj“Us tjjj su6 s)．通过与发酵豆粕生产茵株B3b的比较试验，B9对大豆11S和7S抗原蛋白的降解程度分别为 关键词豆粕；抗营养因子；大豆11S和7s抗原蛋白；胰蛋白酶抑制因子(TI)；筛选 现今配合饲料中90％以上的组成成分为植物性蛋 1材料与方法 白饲料，豆粕则是其中应用最为广泛的植物性蛋白原 1．1材料与试剂 料。然而植物性饲料如豆粕中常常含有一种或多种抗 1．1．1原料与试剂脱脂大豆粕：东海粮油(张家港) 营养因子(Antinutritionalfa由om，ANF)，如抗原蛋白、 有限工业公司出品。 胰蛋白酶抑制因子，植物凝聚素等，它不但影响了饲 芽孢杆菌B3b(Bacillussubtilis)：华中农业大学 料的营养价值和适口性，而且给动物的健康生长和生 发酵工程研究室保藏，一株发酵豆粕工业生产菌株， 产带来了很大的危害，是影响饲料营养价值发挥的主 作为对照菌。 要因素“J。 大豆7S与11S抗原蛋白及两种蛋白的抗血清： 近年来，国内外大量研究表明，豆粕经过微生物 实验室保藏，制备方法见彭楠2007。 发酵处理，可显著降低其中抗营养因子的含量，有效 胰蛋白酶，BAPNA，琼脂糖购于Sigma公司， 消除大豆蛋白的抗营养因子，使之变为～种具有多种 其它试剂均为分析纯试剂。 功能的优质蛋白质饲料41。目前发酵豆粕采用的菌 1．1．2培养基活化斜面培养基：马铃薯(去皮)2009、 株往往以产蛋白酶活性的高低来衡量优劣，针对性不 蔗糖(或葡萄糖)209、水1000mL、琼脂29、pH值自然。 强，在实际的工业应用中对大豆中的抗营养因子降解 效果不理想。 液体种子培养基：马铃薯(去皮)2009，蔗糖(或 优良的菌株是发酵生产的基础与关键，本文利用 葡萄糖)209、水1000mL、pH值自然。 等电点沉淀法提取的大豆蛋白类抗营养因子为唯一氮 豆粕发酵基础培养基：豆粕209、水16mL，pH 值自然。 源，筛选到能够很好降解豆粕中的11S、7S抗原蛋白 和TI等抗营养因子的菌株，较好的提高了发酵豆粕的 1．2试验方法 品质，具有重要的应用前景。 1．2．1采集土样土样采自武汉周边的花坛、竹林及 菜园。提前两个月在各种土壤里埋上适量豆粕，起到 59，以0．03mol／LpH值8．8的Tri卜HCl缓冲液r 初步富集的作用。采集土样时按照多点取样(不同地点、 含0．01mol／L亚硫酸钠)按1：20料液比浸提。3712 不同土层深度)混合的方法，铲去表层土，采用简易 下，180r／min提取lh，取出，将p