小鼠IL-1β、TNF-α+TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用.pdf

小鼠IL一1 F一0c p、TN TaqMan荧光定量 RT—PCR检测方法的建立及应用 陈宏备1，施开创¨，李向涛1，郑敏2，郑喜邦¨，李军2 (1．广西大学动物科学技术学院，广西南宁530005；2．广西动物疫病预防控制中心， 广西南宁530001) 【摘要】：为探讨脑心肌炎病毒(EMCV)感染后促炎细胞因子的表达水平、从分子水平深 入研究EMCV的致病机制，分别针对小鼠促炎细胞因子皿1夕、7NF-a以及管家基因 夕-actin的基因序列设计了1对特异性引物和一条探针，构建含有各自引物扩增序列的重 组质粒作为阳性标准品，建立了检测IL—l real—timePCR 13、TNF—Q和13一actin的TaqMan 检测方法。该方法线性关系好，两种细胞因子及管家基因标准曲线的相关系数均达到0．998 以上：敏感性高，初始模板的检出下限均达到1×101copies／uL：特异性强，只有以总 RNA反转录成的cDNA为模板，并加入特异性引物和探针的反应才检测到荧光信号：重复性 好，组内与组间的变异系数均小于2％。应用所建立的检测方法，对猪源EMCVGXLC株感 13、TNF—amRNA的表达水平进行了检测。结果表明，本研究 染小鼠的脑、心、脾中IL-1 real-time 建立的TaqMan PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好，可以用于小鼠促 炎细胞因子的检测及定量分析。 【关键词】：小鼠；促炎细胞因子；荧光定量PCR：脑心肌炎病毒 and ofa real-·timePCR for DevelopmentapplicationTaqMan assay mouse0UIL．1anand1 一位．伉 noltdetectionceofteF一lⅡN6T CHEN Min2，ZHENG Jun2 Hong-beil，SHIKai．chuan92‘，LIXiang．taol，ZHENGXi．bangl‘，LI ofAnimalScienceand 530005，China；2． (1．College Technology,GuangxiUniversity,Nanning CenterforAnimalDiseaseControland 53000 1，China) Guangxi Prevention，Nanning of was tothe of [Abstract]：A accordingsequencemouse／L一1§and pairprimersdesigned as as arecombinant TNF-a well plasmid genes housekeepinggenefl-actin，respectively,and 收稿日期：201卜0卜 作者简介：陈宏备(1985-)，男，浙江温州人，硕士研究生，主要从事动物疫病诊断与防控技术研究。 +通讯作者：E-mail：shikaichuang@126．com