人精子顶体膜相关蛋白SAMP32+DNA避孕疫苗的构建.pdfVIP

维普资讯 解剖学研究 2006年第 28卷第 3期 AnatRes．2006．Vol28．No．3 · 论 著 · 人精子顶体膜相关蛋 白SAMP32 DNA避孕疫苗的构建 臧卫东 陈雪梅 任秀花 石冰涛 赵青赞 曹 静 郝 莉 (郑州大学基础医学院人体解剖学教研室，郑州450052) 摘【要】 目的 探讨构建hSAMP32DNA疫苗的方法。方法 根据GenbankhSAMP32eDNA序列设计引物，RT．PCR 得到hSAMP32DNA，将其亚克隆至 pGEM．T载体 ，酶切鉴定后测序 ；再构建 peDNA3．1(+)-hSAMP32质粒 ，并对质粒 DNA 定量。结果 (1)人睾丸组织中提取的总RNA显示 2条清晰条带，分别对应28S、18S；RT．PCR扩增产物与预期 的目的基 因hSAMP32长度一致 ；(2)RT-PCR产物与载体 pGEM．T连接后测序 ，显示其与 Genbank的hSAMP32基因序列一致 ；(3)超 螺旋的peDNA3．1(+)-hSAMP32DNA疫苗不含 内毒素。结论 应用亚克隆技术构建 hSAMP32DNA避孕疫苗的载体 peDNA3．1(+)．hSAMP32，为研制避孕疫苗奠定实验基础。 【关键词】 精子； 顶体； 免疫避孕； DNA避孕疫苗 Construction ofthehnmanspernlacrosomalmembrane．associated protein SAMP32DNA contraceptivevaccine ZANG Wei-d0，lg，CHENXue-mei，RENXiu-hua，SillBing-tao，ZHA0Qing-zan，CA0Jing，HA0Li．DepartmentofAnatomy， BasicMedcialcollege，ZhengzhouUnivers ，Zhengzhou450052 China A【bstract】 Objective Toestablisht|leDNAcontraceptivevaccineofhSAMP32．Mehtods ThehSAMP32DNAWSS acquiredbyRT-PCR basedonthehSAMP32sequencein Genbank，andsubcloned intopGEM-T-vector；na dhteesquenceWaS detectedafterdigestion．ThenhtepeDNA3．1(+)-hSAMP32plasmidDNAWas constructednadqunatifide．Results (1)The distincttotalRNA bnadscorrespondingto28Sna d 18S clearlywereisolatedfrom humna testistissue． Th elength ofamplifide RT-PCRproductWaseonsistantwihthtatofproposedtargetgene，hSAMP32．(2)ThesequenceofRT-PCRproductlinkde wiht pGEM-TvectorWasCO-incidentwitIlhtatofhSAMP32inGenbnak．(3)ThesupercoiledpeDNA3．1(+)-hSAMP32containedno endotoxin．Conclusion EstablishmentofDNAimmuno-vaccinepeDNA3．1f+)-hSAMP32byusingsubcloningtechniquemay provideexperimental baedforresearchofcontraceptivevaccnie． K【eywords】 Sperm； Aerosome； Immuno-conrtaception； DNAcontraceptivevaccine 近年来，免疫不孕作为一种控制人 口急剧增长 1 材料和方法 的方法尤其在发展中国家得到广泛的关注If．。 精子抗原的免疫避孕疫苗技术的发展将有利于