石蜡切片方法交流讨论.docVIP

石蜡切片步骤 一、目的要求：简要介绍石蜡切片的制作和苏木精、 曙红染色法（简称H.E染色法）， 借以了解石蜡切片制作的基本原理和一般方法。 二、实验用具：解剖器一套、单面刀片、切片刀、切片机、载玻片、盖玻片、标本瓶、烧杯、量筒、漏斗、染色缸、树胶瓶、酒精灯、毛笔、绘图纸、滤纸、熔蜡箱（或恒温箱）、展片台（或烫板）、小木块、蜡带盒、烤片盒、切片托盘。 三、实验材料：蛙或小白鼠。 四、实验内容： （一）药品： １、７０％、８０％、９０％、９５％酒精及无水酒精： ９５％以下的各级浓度酒精是用９５％酒精加蒸馏水稀释而成。简单的稀释方法：所需稀释的浓度是多少，就量取多少毫升原浓度的酒精，再加蒸馏水至该酒精的原浓度即可。例如，配制７０％酒精，就量取７０ml９５％酒精，然后加入２５ml蒸馏水即成。 ２、固定液： 　常用的固定液有１０％福尔马林、Bouin氏液和Zenker氏液等。Bouin氏液在组织学切片技术方面应用甚广，配方如下： 　苦味酸饱和水溶液 ７５ml 　福尔马林 　　 ２５ml 　冰醋酸 　　 ５ml ３、蛋白甘油： 蛋白甘油是粘贴蜡片用的粘片剂。配方如下：取一新鲜鸡蛋的蛋白，充分搅拌成雪花状泡沫，然后滤去泡沫，加入等量甘油，搅拌均匀，再加入一小粒麝香草酚防腐。 ４、染色液： 　以H.E.染色法为例，需配制苏木精染液和曙红染液。 ⑴、苏木精染液：苏木精是一种碱性染料，它可将染色质染成蓝紫色。配方有多种，现介绍Harris氏苏木精的配制： 甲液： 苏木精 　 　 ０.５ g ９５％酒精 　　　 ５.０ ml 乙液： 硫酸铝钾（或硫酸铝铵） １０g 　 蒸馏水 　　　 １００ ml 　氧化汞 　　　　０.２５g 　 冰醋酸 　　　　几滴 　 先将甲液溶解，再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中，并加热使溶解，然后将两液混合煮沸，离开火焰后缓缓加入氧化汞。冷却后过滤，加入几滴冰醋酸即成。 ⑵、０.５％曙红酒精溶液：即０.５g曙红溶于１００ml９５％酒精中。 曙红是一种酸性染料，它可使多种细胞的细胞质染成粉红色或红色。 ５、盐酸酒精： 盐酸酒精用于分色。配制方法是在１００ml７０％酒精中加入１ml盐酸。 ６、其它： 　二甲苯、切片石蜡、中性树胶等。 （二）、操作步骤： 　进行组织学研究，必须把活的组织或器官制作成切片标本，以便在显微镜下进行观察。切片标本也就是利用组织的不同结构，经过染色后呈现出不同的颜色和不同的折光率而制作的。制片的方法众多，但基本要求是尽量保持结构的真相，切成薄的切片，应用不同的染色方法，使内部结构清晰易见。 　石蜡切片法是最常用的一种制片法。其制作过程是：取材→固定→冲洗→脱水→透明→浸蜡→包埋→切片→贴片→烤片→脱蜡→复水→染色→脱水→透明→封藏。现分述如下： １、取材和固定： 固定的目的在于保存组织内细胞原有的结构和形态，使其与生活时相似，因此要求固定的材料越新鲜越好。把动物杀死后应立即割取组织块，并快速投入固定液中。 将蛙或小白鼠快速剪去头部，打开腹腔，用锐利的刀片割取小块组织（肝、肠等）。 组织块的大小以厚度不超过５mm 为宜。 然后， 将取下的组织块迅速投入Bouin氏固定液中。固定时间为数小时至２４小时（需视组织块的大小而定）。 ２、冲洗： 经固定的材料，可根据不同的固定液，分别用水或酒精冲洗，以洗去固定液，否则固定液留在组织会有碍染色. 　用Bouin氏液固定的材料,可直接移入70％酒精中，多换几次酒精，直至无黄色时为止。也可在酒精中加入几滴氨水或饱和碳酸锂溶液，以迅速洗去黄色。但留少许黄色也无妨碍。 　浸洗后的材料若暂时不制片，可保存于７０％酒精中。 ３、脱水： 　柔软并含有多量水分的组织是易切成薄片的，故必须增加组织的硬度。石蜡切片法就是使石蜡渗入组织，以达到支持增硬的作用。但水与石蜡是不相混合的，因此，在浸蜡、包埋前须将组织中的水分完全除去，这一步骤即为脱水。 　常用的脱水剂是酒精。脱水时，先从低浓度的酒精开始，然后，递增浓度，直至无水酒精。具体方法是，将材料经７０％酒精→８０％酒精→９５％酒精（Ⅰ）→９５％酒精（Ⅱ）→无水酒精（Ⅰ）→无水酒精（Ⅱ），各级酒精１－２小时。脱水应彻底，