高等植物DNA的提取和纯度鉴定.docVIP

高等植物DNA的提取和纯度鉴定总结报告 药学院08级本科一班 周正昌3008213029 阙梦3008213030 报告内容 预实验情况 实验中问题 同学的意见 我们的总结 一、预实验情况（按实验日期排列） 9.10实验情况 此次是我们第一次正式实验 先前培养了小麦，发现霉变现象。 进行了基础的配液工作，将实验需要的试剂进行量取和称量。 向老师学习了凝胶电泳的使用方法和凝胶的制作。 处理： 经过我们的讨论和询问老师得知小麦每天需要清洗才能保证霉菌被去除。（只需麦芽的生长速度快于霉菌即可）。 初步确定了实验时需要的试剂的量和规格，和老师沟通，解决实验时药品供应。 9.11实验情况 实验任务： 完成第一次DNA的提取。 实验过程： 小麦芽已经部分长成，摘取合适长度的小麦芽进行实验，其他的小麦芽继续放入恒温箱培养。 实验时由于在液氮研磨过程中缺乏液氮保护，造成研磨时小麦芽不能成细分状。（此现象会对实验结果产生影响） 按步骤完成实验的提取过程。 实验问题 研磨： 由于小麦芽比较长，且较多量的小麦芽接触液氮后相互间间隙很大，比较蓬松且脆，研磨时很容易使得小麦芽的磨碎物蹦出使得小麦芽损失。 研磨时如果不能除净小麦芽上残留的水分，或者不在液氮的保护下进行实验会对实验结果造成什么影响？ SS-苯酚问题： 离心管不严，倾倒时苯酚会流出。由于苯酚的腐蚀性，虽然为了防范危险已经戴了手套，但是仍应该在实验时重点提出。 第二次离心后的上层水相转入烧杯再转移入离心管比较复杂，能否合并为一步以减少复杂性 RNase 处理步骤不做对实验的影响。 蛋白质离心除去步骤不重复可能造成的影响。 实验结果： 成功制得了DNA样品。放入冷藏柜冷藏待用。 实验计划： 准备下一步的实验方法及改进，讨论实验中出现的问题。 9.12实验情况 实验目的： 为验证实验的有效性以及探索更优的方法， 对实验进行下一步的对照组DNA提取。 采用标准方法进行测定，（保证小麦芽表面无水条件下进行实验，同时注意了部分研磨操作，提前预冷了研钵，其他试剂和操作与之前基本一致） 实验结果： 成功完成了对照组的DNA提取。熟悉了提取的操作步骤。 9.13实验情况 实验目的： 完成对照组实验组的紫外分光测定。 进行凝胶电泳。 实验过程： 在常志静学姐的指导下我们进行了第一次的凝胶电泳实验。 虽然提前学习了学姐的指导，但是实验途中还是发现了许多问题。 1 如何进样。 2 如何计算进样量。 3 如何设计合适的电泳时间保证最好的分离效果。 紫外分光测定： 第一次进行紫外测定发现DNA样液的数据超过了检出限，仪器显示“OVER”，在和老师的沟通下，发现了仪器上的问题还有比色皿的问题，使得问题得到了解决。 紫外分光问题：DNA的稀释倍数不容易确定，差异很大，尤其是和小麦的量，DNA提取操作有很大关系。 在和之前做的DNA样液对照试验发现： 紫外对照结果： 两组数据均超过正常值 A260/A280 小于1.8显示DNA中蛋白质含量比较高。 琼脂糖凝胶电泳实验表明： 研磨时不成粉状的（缺乏液氮保护的）一组颜色较浅（基本无颜色）另一组荧光稍可见。 凝胶电泳实验总结： 虽然成功进行了电泳实验，但是效果不是很理想，DNA基本只在原点处没有发生条带移动。 载样的大小还不能确定好。 本次试验总体总结： 实验验证了表面干燥的小麦芽分解相对较少，下次实验应该加以应用。 由紫外数据发现RNA含量不多，解决了之前是否使用RNAse 以纯化DNA的问题。 凝胶的制备和电泳操作已经基本清楚。但是是否是由于我们电泳载样量不足造成的荧光不明显我们并不清楚。 下次实验目的： 对已经验证的实验步骤进行标准化实验，重复试验以确定稳定性。 再次进行凝胶电泳的电泳条件的探究。 9.13实验情况 实验目的： 1．对已经验证的实验步骤进行标准化实验，重复试验以确定稳定性。 2．再次进行凝胶电泳的电泳条件的探究。 3．为了实现我们对实验结果的可控性分析，我们引入了Marker作为标尺鉴定电泳结果。 实验过程： 本次实验注意到了之前总结的问题，包括小麦芽的处理，研磨时的液氮保护，防止溅出，实验的连续性，去掉了转移至烧杯中的步骤，直接在离心管中操作。 实验的安全性苯酚使用前务必戴手套。 凝胶电泳使用了标准的Marker标定进行测定。（gold view） 实验结果： 最后处理的DNA 进行琼脂糖电泳后显示Marker颜色也不是很深，证明是载样量问题造成的。也证明了我们的凝胶没有问题，电泳仪等设备和我们的电泳操作没有问题。 但是我们自己的DNA跑得的结果仍不好，说明我们DNA提取还是存在问题的。 9.14 实验目的： 一方面继续探索DNA提取实验，在途中进行录像工作。 录像过程比较繁琐，途中多次NG，也有较多技术问题需要克服。 清晰体现实验过程 如何突出实