多重连接依赖的探针扩增(MLPA)技术在广州地区RhD阴性献血者基因分型研究应用.pdfVIP

多重连接依赖的探针扩增(MLPA)技术在广州地区 RhD阴性献血者基因分型研究中的应用 姬艳丽# 魏玲# 张润青 骆宏 王贞 赵阳 莫春妍 罗广平△ 广州血液中心临床输血研究所，广东广州510095 摘要：目的 采用新型Rh血型系统的MLPA检测试剂盒，对广州地区收集的200名RhD阴性献血者进行基因 分型。方法 采用传统的血型血清学方法，对RhD阴性献血者进行RhD表型鉴定。提取基因组DNA，采用MLPA 检测试剂盒对收集的200名RhD阴性献血者进行RHD基因分型。对于不能明确分型的标本，进行RHD基因直接测 序分析。结果 在200名RhD阴性献血者中，采用MLPA方法对196名进行了明确的基因分型。其中，127名为 RHD基因缺失 （占63.5％）；仅检测到包含RHD1227A突变的DEL等位基因有41例，其中38例包含杂合等位基因， 其余3例包含纯合等位基因；仅检测到RHD(1-2)-CE(3-9)-D(10)等位基因的有23例，其中19例杂合，4例纯合； 3例包含2种不同的RHD等位基因(1条为RHD(1-2)-CE(3-9)-D(10)，另1条为RHD1227A）；其余2例分别包含 杂合的DFR-2(RHD-CE(4)-D）及弱D15型 （RHD845A）等位基因。在其余4例直接测序分析的标本中，2例包含杂 合的RHD711delC突变；1例1条等位基因为MLPA检测到的包含RHD1227A突变的DEL等位基因，另1条为包含 711delC突变的RHD等位基因；其余1例的1条等位基因为MLPA检测到的RHD(1-2)-CE(3-9)-D(10)，另1条为 包含新突变的RHD等位基因(1154G＞T，385Gly＞ Val)。结论 MLPA检测试剂盒是适用于中国人群的1种快速、 有效的高通量基因分型方法，能够对中国人群常见的各种RHD基因型进行明确分型，适用于参比实验室相关疑难标 本的基因分型检测。也可应用于中国人群常见的Del表型检测，使Del表型患者不必再输注RhD阴性血液，节约稀有 的RhD阴性血液资源。 关键词：多重连接依赖的探针扩增(MLPA)技术；Rh血型系统；RhD阴性；RHD基因合子型；基因测序 中图分类号：R457.1+1 文献标识码：A Applicationofthenovelhigh-throughputMLPAassayinRHDgenotypingofRhD(-)donorsfromGuangzhou JIYanliWEILingZHANGRunqing InstituteofClinicalBloodTransfusion,GuangzhouBloodCenter,Guangzhou 510095,China Abstract:Objective ToapplytheRHMultiplexLigation-dependentProbeAmplification(MLPA)genotypingassay ingenotypingof200phenotypicallyRhD-negativedonorsfromGuangzhou.Methods Intotal,200donorswithRhD-nega tivephenotypewererecruitedfromGuangzhouBloodCenter.StandardserologicalmethodswereusedtodeterminetheRhD phenotypeinthesedonors.TheMLPAassaywasusedtogenotypetheRHDstatusinthesedonors.Furthermore,thisassay candetermineRHDcopynumbervariation(zygosity).WhentheMLPAwasnotabletoassignavariant,directsequencing ofallexonsoftheRHDgenewasperformed.Results UsingtheMLPAassayin196ofthe200RhD-negativedonors,loss oftheRHDgeneand/oraberrantRHDgenescouldbedetermined.In127individuals(63.5％),theabsenceofallRHD exonswasconfirmed.AsiantypeDEL(G1227A)wasdetectedhet