核酸快速检测技术在松材线虫检测应用.pdfVIP

2010}t±*n*☆《≠$日{T女女t# 核酸快速检测技术在松材线虫检测中的应用 阵i芳詹国辉高滞 215tlO_】 #Ⅲm^*＆nn＆mT】．##M 快速的替艇B成为控制谴擂害扩散的重要手鞍之一。本文详扫舟绍7梧酸试纸条陡连检测袭术和切口酶 桉碗一l温扩增拽术的原理，综述7分子生物学技术在档材墁虫十的应用，并分析7柱醯试纸条快速检删技 术和切口酶棱酸匣温扩增技术在松材线虫柠测十的应用前景二 关键词拙拧缦虫，核酸试纸枭快速检测技术；切口酶桂醋匣温扩增求 1核酸试纸条快速检剥技术 3)切¨酶辨认特件性DNA序列，在·条链L 枝睫试纸条快建检测技术是以免疫层析显色 甘J开一个缺n，暴露其3’末端； }点为基础，对棱陵的扩增产物进行检测的一种技4)DNA聚合酶“切【I为起点，以未被切断的 术。该技术的原理是应用包被上特异性的植酸或 单链为模板．合成新链、井将“旧链”剥离。被剥离 蛋口质的纳米级胶体金I唢粒(或其它有色颗粒)，和 的单链DNA复可以作为模板，与另引物杂交，指 特别标记的棱酸引物及探针，把扩增后的检测产物 导新一轮的合成。新合成的双链DNA叉恢复了切 和胶体金颗粒连成一体，在试纸条的检测线(T线) 口酶位点，切口酶在此位点乖新切开一个缺口。延 上显色。此时则可判断检测为阳性。如果无日标 长、剥离等步骤义从新开始； 检测物，则特异性探针将无法把扩增产物与标记物 5)上述各反应步骤在恒温的条件下反复、连续 连接，导致无法显色，即表示椅测结果为研件。如 地进行。DNA靶分子呈指数扩增，直到原料耗尽或 图l所示。 酶活性丧失。在优化的条件下靶分子可被扩增数 十亿倍。(如图2 Ⅵ口㈣㈧}(NENI I… …I， 委蚕 ．：i二，=； 日哇l| 目 ·i—I^上+．．—‰：． ；篙峙；；铲 1；糯胖2。 匿1 枝酸试纸枭陕速橙测技术 (：＆*自MK“，T‰*＆W＆， “Hlmc《～目*，(#I％目目Ⅲm自☆#mn I沿：嚣二：；§!勰。 ……．t“一…40 2恒温扩增技术原理 —L：望§E￡一’——一 切u酶核酸恒温自增技术的基奉原理如下： ：：；；：… I)特别设计的扩增引物与DNA靶分子特异性 一===2■一 图2切口酶核蘸匣温扩增技术原理 杂交。该引物尾部带有一段特异性切口酶的辨认 3松材线虫的研究进展 序列，如BstNBI的辨认序列GAGTCNNNN(N为任 由松材线虫(0xylophil“)引起的松树萎蔫 何单核苷酸)； 病，是种松树毁灭性病