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叶绿素测定仪检测茶树叶片的应用 摘 要：叶绿素测定仪是一种快速、无损地测定植物叶片叶绿素和氮素含量的有效工具。采用分光光度计法和凯氏定氮法分别测定茶树叶片叶绿素含量和氮素含量，并与叶绿素测定仪 测定的CCI 值进行相关性分析。结果表明，CCI值与叶绿素含量均呈显著正相关，其中单位面积叶绿素a（R2 为0.972 8）、b（R2 为0.858 6）及总量（R2 为0.977 4）与CCI 值的相关性均高于单位质量叶绿素含量与CCI 值的相关性；不同品种茶树叶片叶绿素含量差异明显，但仍与其CCI 值有良好的线性关系。研究还显示，CCI 值和叶片全氮含量之间呈显著线相关性，其R2 为0.982 8。说明叶绿素测定仪TYS-A 在茶树叶片叶绿素和氮素含量估算上具较好的适用性。 叶绿素是一类与光合作用有关的重要色素，常作为评价植物光合作用能力、突变、环境胁迫和营养状态的一个重要指标[1]。叶绿素与氮素关系密切，氮素缺乏会影响叶绿素的生物合成或导致其分解，从而使叶绿素含量降低。在作物、林木育种与栽培管理中，简单、快速、无损地测定叶绿素含量和氮素含量是十分必要的。 目前，在生产和研究中TYS-A（浙江托普仪器,中国）（下图）是被广泛应用的叶绿素测定仪，其读数值与叶片中叶绿素和氮素含量相关性较高，可用于测定叶绿素和指导施肥。在玉米[2]、水稻[3]和棉花[4]等多种作物氮素营养诊断应用中有不少报道，而TYS-A 在纸皮桦[5]、糖枫[ 6]和苹果[7]等林木、果树中也有较好的适用性。TYS-A是通过植物叶片在940 nm、660 nm 不同的吸收率来计算叶绿素含量指数（chlorophyll content index，CCI 值），其测量面积71 mm2，远大于SPAD-502 的6mm2，一次测定的数据更能代表叶绿素含量[8]。李佛琳等[9]使用TYS-A 和SPAD-502 测定烤烟的叶绿素含量时，相关系数分别为0.949 9、0.875 5，CCI值与叶绿素含量相关性更高。 尽管茶园施肥管理需要精确的施肥量，但也需要建立一个无损、快速的方法来评价其氮素营养状态。因此，本试验通过研究CCI 值和茶树叶片中叶绿素、氮素含量的相关性， 为今后叶绿素测定仪TYS-A 在茶树上的应用提供依据。 1 材料与方法 1.1 材料 茶树品种舒茶早、乌牛早、龙井长叶、平阳特早和皖茶91 种植于安徽农业大学大杨店农业园。 1.2 方法 1.2.1 CCI 值与叶绿素含量的相关性 CCI 值的测定：选取皖茶91 当年生枝条5 个，用叶绿素测定仪TYS-A 测定芽下第1～6 叶CCI 值。测定时，尽量避免主脉和有伤害的区域，在叶片中部主脉两边各重复测定3 次。 叶绿素含量的测定：取叶绿素测定仪 测定后的茶树叶片，表面擦净，中部用直径为6 mm 的打孔器打孔。取20 个小圆片，称重，加入少许石英砂和95%乙醇，研磨至匀浆，过滤、定容，于649 nm、665 nm处测定吸光度，具体方法参照《植物生理生化实验原理与技术》[10] 。 计算公式为： 叶绿素 a 含量（mg·cm-2）=V×（0.013 95×A665－0.006 88×A649）/叶片面积（cm2）； 叶绿素 a 含量（mg·g-1）= V×（0.013 95×A665－ 0.006 88×A649）/叶片质量（g）； 叶绿素 b 含量（mg·cm-2）=V×（0.024 96×A649－ 0.007 32×A665）/叶片面积（cm2）； 叶绿素 b 含量（mg·g-1）= V×（0.024 96×A649－ 0.007 32×A665）/叶片质量（g）； 总叶绿素含量=叶绿素a 含量+叶绿素b 含量 式中：V—叶绿素提取液体积（mL）；A649—叶绿素提取液在649 nm 处的吸光度值；A665—叶绿素提取液在665 nm 处的吸光度值。 用简单的线性关系来表示 CCI 值和叶绿素间相关性。并选取舒茶早、乌牛早、龙井长叶、皖茶91和平阳特早5 个品种，测定每个品种芽下3～5 叶的CCI 值和叶绿素含量，分析不同茶树品种对其相关性的影响。 1.2.2 CCI 值与叶片总氮含量的相关性 选取皖茶91、舒茶早、乌牛早、龙井长叶和平阳特早5 个茶树品种当年生芽下3～5 叶，测定CCI 值。测定后将叶片表面擦净、剪碎，放到铝盒中，105℃杀青15 min，75℃烘至恒重，磨成粉末，每个样品称取0.25 g 样品进行消化，用凯氏定氮法测定其氮含量，同时做试剂空白试验，具体方法参照《茶叶生物化学实验教材》[11]。 计算公式为： 样品中全氮的含量（%）=（V1