人慢性粒细胞白血病bcr-abl基因反义寡核苷酸对K562细胞株的凋亡诱导作用研究.pdfVIP

中国癌症杂志 2o15年第25卷第3期 CHINA 0NCOLOGY 2015Vo1．25No．3 167 人慢性粒细胞 白血病bcr-ab1)A-因 反义寡核苷酸对K562~m胞株的凋亡 诱导作用研究 平娟 ，赵娜 ，王保全 ，申智慧 ，阴明星 ，庞晓斌 。，陈传波 1．河南大学淮河临床学院，河南开封475001； 2．郑州大学附属肿瘤医院血液科，河南郑州450009； 3．河南大学药学院化学生物学实验室，河南 开封475004 [摘要 ] 背景与目的：随着人类基因组计划的完成，人们的研究重点已转向基因功能的研究，反义核 酸技术无疑为这项宏伟工程提供了一个新的发展方向。目前，国内关于反义寡核苷酸诱导K562细胞凋亡的 实验研究很少。本实验在体外构建针对人慢性粒细胞白血病(chronicmyelogenouleukemia，CML)bcr-ab融合基 因mRNA的反义寡核苷酸 ，探讨bcr-ab饭 义寡核苷酸对K562细胞凋亡的诱导作用。方法 ：以bcr-abl融合基因 mRNA翻译起始点融合前区19个寡核苷酸为作用靶点，设计反义寡核苷酸 ，以其反义寡核苷酸序列转染人慢性 粒细胞K562细胞，采用Hoeehst染色法观察不同浓度寡核苷酸对K562细胞株的凋亡情况，采用蛋白[质]印迹法 (Westernblot)检测自噬凋亡蛋白LC3一lI的表达情况，采用流式细胞术(flowcytometry，FCM)检测细胞周期变化 ， 采用JEM一4000EX电镜术检测细胞凋亡形态变化，通过DNA琼脂糖凝胶 电泳检~JlK562细胞凋亡情况。结果 ： Hoechst染色结果显示，bcr-ab皈义寡核苷酸能显著促进K562细胞的凋亡，且呈现一定的浓度依赖性。Western blot检测结果显示 ，bcroabl反义寡核苷酸各浓度组凋亡 自噬蛋 白LC3一lI表达水平明显高于对照组，差异有统计 学意义 0．05)。FCM检测结果显示 ，bcr-ab皈 义寡核苷酸作用于K562细胞后 ，细胞周期阻滞于GoG／期。各组 Go／G．期 、s期细胞数量与对照组相 比，差异有统计学意义 0．05)。在JEM一4000EX电镜下可见明显的新月型凋 亡小体。DNA琼脂糖凝胶电泳显示 ，10、30~tmol／mLbcr-ab皈义寡核苷酸组可以明显观察到以180-200bp碱基 对整倍数出现明暗间隔的DNA梯状条带。结论：Bcr-abl反义寡核苷酸可显著诱导K562细胞凋亡，为临床上基 因治疗人CML提供一定的参考。 [关键词] 人慢性粒细胞白血病；Bcr-abl；~因；反义寡核苷酸；K562细胞 ；凋亡诱导 DOI：10．3969／j．issn．1007—3969．2015．03．002 中图分类号：R733．7 文献标志码 ：A 文章编号：1007—3639(2015)03．0167—06 Theapoptosisinduction011K562cellsbytheCML bcr-ablgeneantisense0lig0nucle0tidesPING Juan ，ZHAO Na，WANG Baoquan ，SHEN Zhihui，YIN M ingxing，PANG Xiaobin，CHEN Chuanbo (1．TheHuaiheClinicalCollegeofHenanUniversity,KaifengHenan475001，China；2．Departmentof Hamatology,theCancerHospitalAffiliatedtoZhengzhouUniversity,ZhengzhouHenan450009，China； 3．TheChemicalBiologyLaboratory，CollegeofPharmacy，HenanUniversity，KaifengHenan475004， China)