免疫学测定技术及应用研究进展.pdfVIP

感染性疾靖实验室诊断研讨会暨实验室管理论坛 大会报告 免疫学测定技术的应用与研究进展 虞伟(南京军区南京总医院解放军临床检验医学研究所，南京210002) 现代免疫学测定技术源于标记技术的发展。继1941年coons等创立荧光素标记抗体技术 (fluorescent antibody imunoassay，EIA)，包括：酶免疫组化技术，固相酶免疫测定(如ELIsA，westernblotting)和均相酶免 疫测定(又称酶放大免疫分析技术，EMIT)。另一传统标记技术为胶体金标记免疫分析始于上个世纪80 年代．除应用于免疫电镜外，广泛用于免疫渗滤和免疫层析试验”’。除此之外，目前又相继报道建立了 一些新型标记免疫测定技术，如元素标记免疫测定，核酸标记免疫测定和量子点标记免疫测定技术。这 些技术及由此衍生的实验方法有些已在临床免疫学检验中得到了广泛的应用，有些尚处于研究和探索 阶段。本文主要就相关技术的应用及进展综述如下。 1．荧光素标记的免疫测定技术 1．1同接免疫荧光技术(IFA)长期以来用作细胞内抗原定位或相应抗体检测的“金标准”，适合用 (ANCA)等自身抗体，及某些病原体如EB病毒、SARS病毒、军团菌及其他呼吸道病原体抗体的检测等”’…。 目前已有商品化的全自动操作系统，可以自动完成对样品的稀释、加样、温育、洗涤等过程。最后借助 于激光共聚焦显微镜或荧光显微镜观察结果。其技术特点是减少手工操作可能造成的偶然误差，提高 了免疫试验的标准化和自动化程度，缩短了实验所需的时间。 1．2流式细胞免疫荧光分析(Fcjl)该技术借鉴了荧光抗体与血细胞分析仪原理，经历了从相对细 胞计数到绝对细胞计数．从细胞膜成份到细胞内成份，从单色荧光到多色荧光的发展历程，并将分子 表型与免疫表型分析相结合，因而成为细胞分析和分选的重要工具”1。其工作流程包括标本处理与荧 光染色，激光聚焦检测，流动控制，信号的处理与放大，以及计算机分析和结果打印。在细胞表型 (celluar phenotype)分析、DNA含量与细胞周期分析、细胞内及核膜成分分析及细胞分选等领域有着 广泛的应用。 1．3以荧光标记为基础的四聚体分析技术该技术主要是基于删C／抗原肽复合物与T细胞表面受体 (TcR)相互作用的原理而设计的。首先选择某一抗原特异性T细胞所识别的抗原表位肽以及与该表位肚 结合的HLA分子，使之形成HLA一肽复合物，进一步生物素化后再与特定荧光素(如PE)标记的链霉亲合素 按照一定比例混合，如此构建的四聚体即可通过其本身删C分子提呈的表位肽与T细胞表面的TcR进行 精确识别和高亲和力结合而达到检测抗原特异性T细胞的目的”1。由其衍生的主要技术类型包 括：(1)-田C一肽四聚体流式细胞术．特点是快速、敏感、特异，可计数所有抗原特异性T细胞，不管这些 细胞是原始的或效应的，有功能的或无功能的：(2)原位删c一肽四聚体染色法(IsT)，又可分为直接法和 问接法两种，用于组织切片染色，检测抗原特异性T细胞在空间和时间上的分布：(3)删c一肽四聚体磁 分离技术，分离的抗原特异性T细胞可用于进一步分析其生物学功能：(4)瑚c_肽四聚体ELIsA 法：(5)删c-肽四聚体分子微阵列技术。上述以荧光标记为基础的四聚体分析技术均已应用于病毒(如 研究中。 2．酶标记免疫测定技术(EIA) EIA目前仍为临床免疫学实验室最广泛应用的实验技术之一，由此衍生出的常用技术和新方法主要 有如F几种． 2．1酶联免疫吸附试验(enzyⅢe—linkedimunosorbantassa y，ELISA)理论上只要能获得某一抗 感染性疾病实验室诊断研讨·会，}实验室管理论坛 大会报告 原纯品或相应的抗体制剂，即可对其相应的抗体或抗原进行ELISA测定。因此，几乎所有的可溶性抗原、 抗体系统均可用该技术进行检测，其特点是实验结果具有较高的敏感性和特异性，最小可测值达ng甚 至pg承平，但易受诸多测定因素(如包被抗原、抗体的质量，徽孔板表面的吸附性能等)的干扰。与 放射免疫分析相比．ELISA技术优点是标记试剂相对比较稳定，且无放射性危害。因而在血源病原体(抗 原平¨抗体)，体液中各种微量蛋白(肿瘤标志物，细胞因子，小分子激素，自身抗体和某些毒品、药物