第四章 基因工程的操作过程-9.22.pptVIP

一、DNA的体外重组（切与接） 二、重组DNA分子的转化和扩增（转与增） 2、重组DNA分子导入植物细胞 4）基因枪转化法： 5）激光微束穿孔法： 6）多聚物介导法 7）花粉管通道法 3、重组DNA分子导入哺乳动物细胞 1）DEAE-葡聚糖转染法： 2）磷酸钙转染法： 3）脂质体介导法： 4）显微注射法(microinjection) 5）病毒颗粒转染法： 三、转化子的筛选和鉴定（检） 3）PCR法： 1）目的基因转录产物检测： 2）目的基因翻译产物的检测： 影响转化率的因素： 载体及DNA重组子方面 受体细胞方面 转化方法方面 1、载体及DNA重组子方面： 载体本身的性质 载体的空间构象 插入片段的大小 1）载体本身的性质： 不同载体转化同一受体细胞，转化率不同。 2）载体的空间构象： 经切、接操作后的载体DNA，因空间构象难以恢复，转化率比超螺旋结构的质粒低2个数量级。 质粒的超螺旋构象转化率最高； 3）插入片段的大小： 重组质粒分子量越大，转化效率越低。大于20kb的重组质粒很难进行转化。 2、受体细胞方面： 如：pBR322转化大肠杆菌JM83，转化率很低（103/?g DNA）；但对ED8767株的转化率则较高（106/?g DNA）。 受体细胞必须与载体匹配。 3、转化方法方面： 受体细胞的预处理 供受体的比例 转化方法 1）受