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植物组织中丙二醛含量的测定.ppt
植物组织中丙二醛含量 的测定 一 原 理 植物器官在逆境条件下或衰老时, 往往发生膜脂过氧化作用,丙二醛(MDA)是其中产物之一, 通常将其作为脂质过氧化指标, 用于表示细胞膜脂过氧化程度和植物对逆境条件反应的强弱。 二 材料、仪器设备及试剂 (一)材料 植物叶片(经逆境条件处理) (二)仪器设备 研钵, 试管, 移液管, 恒温水浴锅, 离心机,分光光度计 (三) 试剂 10 % 三氯乙酸 (TCA) 0.6% 硫代巴比妥酸 (TBA) 三 实验步骤 (1)MDA的提取 取0.5g叶片剪碎,加10% TCA 2ml和少量石英砂,研磨；进一步加入3ml TCA充分研磨,匀浆液以4000r/min下离心10min,上清液即为提取液。 (2)显色反应及测定 吸取上清液2ml,加2ml 0.6% TBA,混匀,在沸水浴中煮沸15min,迅速冷却,在4000r/min下离心5min 。取上清液测定532nm和450nm下的OD值。 对照以2ml TCA 代替提取液。 (3) 计算 按公式计算MDA的含量(μmol/g): MDA含量(μmol/g) = MDA的浓度(μmol/L) ×提取液总体积 (0.005L) × 稀释倍数（2）÷质量(0.5g) =C2 ×0.02 四 注意事项 取上清液时要小心，不要将沉淀取出 使用离心机时, 一定要注意平衡. 返回 * * 丙二醛 (MDA) 硫代巴比妥酸 (TBA) 高温酸性 三甲基复合物 (3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮) (红棕色) 上述反应在532nm处有最大吸收波长 但此反应受可溶性糖的极大干扰： 糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收 (糖与TBA反应产物的最大吸收波长在450nm处) ＋ 所以，测定MDA含量时需排除可溶性糖的干扰 根据Lambert-Beer定律,对最大吸收光谱不同的两个组分的混合液,代入数值，计算得出混合液中两种组分的浓度公式： 可溶性糖：C1/(mmol/L)=11.71 OD450 MDA： C2/(μmol/L)=6.45 OD532－0.56 OD450
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