生物实验复习总结.docVIP

E1 一、无菌操作的技术主要包括哪些 保持安静整洁的无菌工作区域 保持干净整洁的工作面 注意个人卫生 无菌操作步骤 二、细胞培养的基本方法有哪些 细胞培养室的设置要求 必备的仪器设备 无菌操作技术 细胞培养用液的配置与消毒 器皿的清洗和消毒 原代培养与传代培养 三、细胞传代培养的优点和缺点是什么？ 优点： 繁殖细胞使数量增加 可以进行克隆化 培养细胞的同质性增加 可以进行特征鉴定与冷冻保存 缺点： 细胞之间的选择，过度生长导致细胞去分化 分散细胞过程中造成酶消化和机械消化引起的损伤 反复多次传代容易造成细胞表型及基因型的不稳定性 四、用胰蛋白酶消化贴壁细胞时为什么细胞会变圆？ 因为胰蛋白酶可以消化细胞外基质，并且降解跨膜蛋白的胞外区是单层培养的 铁臂细胞彼此分离，此时由于细胞内部细胞骨架张力和培养液张力的作用，所以变圆 五、细胞传代比例与哪些因素有关？ 细胞的形态、数量、密度和距离上一次消化细胞长好的完整度时间 E2 一、用于观察细胞基本形态的显微镜有：普通光学、荧光、相差、激光扫描共聚焦显微镜 用于观察亚细胞的显微镜有： 电子显微镜技术 二、染色体压片标本制备过程： 取材—固定离析—压片的制作—观察 细胞分裂指数=（分裂细胞数/细胞总数）*100% 三、细胞的形态与哪些因素有关？ 基因：植物？动物？哪部分组织？变异？ 环境：渗透压，pH，温度，年龄 四、几种细胞分裂特点 质分裂；核分裂 有丝分裂；无丝分裂；减数分裂 E3 一、常用的亚细胞组分分离方法有：差速离心法、密度梯度离心法、超速离心法 二、为什么本实验要在低温下操作？ 抑制细胞内各种酶活性，防治结构被消化 三、核制片染色为什么要从高到低过梯度酒精？ 缓慢恢复水，防止皱缩 四、用冷玻片滴片有何意义？ 增强附着力，是细胞易于贴在玻片上 液滴打开后，易均匀铺开 五、细胞生物实验课接触过几种制片方法？ 压片、切片、涂片、滴片 E4 一、什么是Feulgen反应？ DNA分子在60℃HCl水解下，游离出来的醛基能与schiff试剂反应生成紫红色化合物 为DNA特有的反应。 二、乳酸脱氢酶？ 在乳酸脱氢酶的作用下，乳酸可以形成丙酮酸，并在此过程中，NAD+生成NADH+氢离子，后者会发生反应，生成紫蓝色的双甲臜沉淀，因此会在细胞活性部位显示为蓝紫色沉淀。 三、过碘酸希夫反应，可以显示糖原，为深玫瑰红色化合物。 四、苏丹黑使细胞中的脂类显示为黑色 五、为什么要用蟾蜍血细胞做DNA显色反应，可否用人的红细胞做次反应？ 蟾蜍血细胞中含有细胞核 六、在Feulgen反应中，水解时间太长或太短可能出现什么结果？ 水解时间太长，导致醛基进一步氧化，无法显示出紫红色区域 水解时间太短，导致醛基生成不彻底 E5 一、folin酚法的实验原理是？ 蛋白质与铜离子在碱性调件下生成 蛋白质-铜复合物，蛋白质-铜复合物与酚试剂生成蓝色混合物，并且颜色程度与蛋白质浓度成正比，在650nm出比色 二、分光光度法的基本原理是？ E6 一、Km值的测定 ，林贝方程 E7.8.9 一、离子交换柱法原理？ DEAE—纤维素为阴离子交换柱，在PH=6.5条件下，带有正电荷，并能够吸附清蛋白等 二、电泳法的分离依据 带电荷数量：多的跑的快 分子量大小：小的跑得快 分子形状 三、影响电泳的因素： 带电粒子本身：PH、电荷、大小、形状 环境因素： PH=PI,不泳动 PHPI 带正电向负极泳动 PHPI 带负电向正极泳动 缓冲液离子强度: 强度低，分的快，但是区带不清楚 强度高，分的慢，但是区带清晰 电场强度：与速度呈正比，但是速度过快，蛋白质变性、 E11.12 一、谷丙转氨酶的临床意义？ GPT（ALT）在肝细胞中含量较高，当发生肝炎、中毒性肝细胞坏死等肝脏疾病时，可引起血清GPT的升高。因此定量测定血清GPT的活性可以作为肝脏相关疾病诊断和预后的监测指标之一 二、原理：丙酮酸二硝基苯腙为棕色化合物，在波长520nm处比色 三、测定血清中尿素氮含量的意义？ 血中尿素含的氮成为BUN，平均约占NPN一半，尿素须经肾脏随尿排出，故肾脏有某些疾病的时候，可阻碍血中尿素排出，导致BUN升高。 四、糖尿病所能引起的症状： 脂代谢紊乱，酮症，酸中毒 心脏大动脉粥样硬化，心肌梗死 闹动脉粥样硬化，出血性或缺血性脑卒中 微血管病变，糖尿病肾病，视网膜病