生物技术制药题库附加答案.docVIP

1 .利用基因工程技术生产药物的优点？ 答：1大量生产过去难以获得的生理活性蛋白和多肽，为临床使用提供有效的保障； 2、可以提供足够数量的生理活性物质，以便对其生理、生化和结构进行深入的研究，从而扩大这些物质的应用范围； 3、可以发现、挖掘更多的内源性生理活性物质； 4、内源生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可通过基因工程和蛋白质工程进行改造和去除； 5、可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。 2. 基因工程药物制造的主要程序有哪些？ 基因工程药物制造的主要步骤有：目的基因的克隆，构造DNA重组体，构造工程菌，目的基因的表达，外源基因表达产物的分离纯化产品的检验 逆转录法 ：逆转录法就是先分离纯化目的基因的 mRNA，再反转录成 cDNA，然后进行 cDNA 的克隆表达。 ⒈ mRNA的纯化⒉ cDNA第一链的合成⒊ cDNA第二链的合成⒋ cDNA的克隆⒌ 将重组体导入宿主细胞：⒍ cDNA文库的鉴定：抗性基因失活法、噬菌斑颜色改变法⒎ 目的cDNA克隆的分离和鉴定：核酸探针杂交法、免疫反应鉴定法 4． 基因工程宿主菌应满足那些要求？ 答：1、容易获得较高浓度的细胞；2能利用廉价易得的原料；3、不致病、不产生内毒素；4、发热量低，需氧低，适当的发酵温度和细胞形态；5、容易进行代谢调控；6、容易进行DNA重组技术操作；7、产物的产量、产率高，产物容易提取。 5. 表达载体须具备哪些条件？常用载体有哪些？ 答：1、能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2、具多个限制酶切点，但每种切口最好只有1个，以便与外源基因连接。 3、具有某些标记基因，便于进行筛选。 4、所产生的mRNA必须有翻译的起始信号。 5、具有很强的启动子有很强的终止子1、细菌细胞的质粒。2、λ噬菌体载体。 6 。真核基因在原核细胞中表达载体必须具备条件⑴载体能够独立复制。载体本身是一个复制子，具有复制起点。⑵应具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记，以利于外源基因的克隆鉴定和筛选。⑶应具有很强的启动子，能为大肠杆菌RNA聚合酶所识别。⑷应具有阻遏子，使启动子受到控制，只有当诱导时才能进行转录。⑸应具有很强的终止子，只转录克隆的基因，所产生的mRNA较为稳定。⑹所产生的mRNA必须具有翻译的起始信号AUG和SD序列，以便转录后顺利翻译。 影响目的基因在酵母菌中表达的因素⑴外源基因的拷贝数：⑵外源基因的表达效率；⑶表达产物的稳定性；⑷细胞代谢负荷：⑸工程菌的培养条件 8.影响目的的基因在大肠杆菌中表达的因素有哪些？ （1）外源基因的计量 （2）外源基因的表达效率：a、启动子的强弱 b、核糖体的结合位点 c、SD序列和起始密码的间距 d、密码子组成 （3）表达产物的稳定性 （4）细胞的代谢付荷 （5）工程菌的培养条件 9 真核基因在大肠杆菌中的表达形式？ 答：有三种形式：(1)融合蛋白的表达形式由一段短的原核多肽和真核蛋白结合在一起的蛋白质,称为融合蛋白.(2)非融合蛋白的表达形式(3)分泌型表达形式