Jurkat细胞株TCRγ基因重排及多重引物扩增分析.pdfVIP

· 738 · 临床与实验病理学杂志 JClinExpPathol2010Dec；26(6) Jurkat细胞株 TCR~／基因重排及多重引物扩增分析 韩西群 ，齐宗利，赵 彤 摘要：目的 分析Jurkat细胞株TcR 基因重排特点，观察多重引物PCR扩增Jurkat细胞株TCR-,／基因重排的效果。方法 TCR 基因重排正向、反向引物配对组合，分别扩增Jurkat细胞株DNA，阳性PCR产物测序并比对分析 ；多重引物组合、降落式 PCR扩增Jurkat细胞株TCR~／基因重排 ，比较多重引物与单对引物扩增效果。结果 两组单对引物扩增产物电泳出现强阳性 条带，测序并比对证实为TCR'y基因重排 ；与胚系基因比对发现，重排后TcR 基因存在删除和增加的碱基序列；多重引物扩 增产物中出现阳性条带的组合，其引物与单对引物组合一致。结论 Jurkat细胞中存在两种不同的TCR~／基因重排 ，重排序列 体现了基因重排多样性。多重引物结合降落式 PCR扩增TCR'y基因重排，扩增效果与单对引物一致。 关键词：Jurkat细胞株；TCR~,基因；基因重排；多重引物PCR 中图分类号：R733．7 文献标识码：A 文章编号：1001—7399(2010)06—0738—04 AnalysisofTCR~,generearrangementinJurkatcelllineandmultipleprimersamplification HANXi—qun，QIZong—li，ZHAOTong (DepartmentofPathology，SouthernMedicalUniversity，Guangzhou 510515，China) Abstract：Purpose ToanalyzethecharacteristicsofTCR GenerearrangementinJurkatcellline，andobservetheeffectmultiple primersinamplifyingTCR-,／GenerearrangementsofJurkatcellline．Methods SenseandantisenseprimersforTCR',／generearrange— meritswerepairedandintroducedtoamplifyDNAofJurkatcellline，respectively．PositivePCRproductsweresequencedandthese— quencesweresubmittedtocontrastingandanalyzing．Multiplecombinationsofprimersalongwithtouch—downPCR wereintroducedto amplifyTCR-／generearrangementsofJurkatcellline，comparingtheeffectofmultipleprimersPCRwiththatofthesinglepairedprim— ers．Results Inamplificationproductsofsinglepairofprimers，twocombinationsshowedstrongbandsinelectrophoresis．Sequencing andcontrastinganalysisprovedtheproductstobeTCR generearrangements．Comparisonwithgerminalgenesequence，therearranged TCR'ygeneimplicatedwithdeletionandadditionofbasesequence．Forthosepresentedpositivebandsinmultipleprimersamplification products，theprimersappliedwereinaccordancewiththatofsinglepairedprimers．Conclusion TwodifferentTCR-／generearrange— mentsexistinJurkatcelllineandtherearrangedsequencesreflectthediversityofTCRygenerearrangements．Multipleprimerswith touch—downPCR amplifyingTCR~／generearrangementcanachievethesa