以BMP-2为靶点的抗骨质疏松药物筛选模型的构建及其应用.pdfVIP

群掌--5-中国 以BMP-2为靶点的抗骨质疏松药物筛选模型的 构建及其应用 杨兆勇 中国E学科学院Ⅸ药生物技术研究所 9 杨兆勇171年生博士 科研经历硕上期间参与国家自然基金项目山羊脾脏来源多脑的分离纯化厦其 抗月6瘤活性研究‘博士期间参与国家自然基金项目‘抗骨质疏松药物筛选模型的研究” 主要工作现土要参与抗骨质疏松药物筛选模型活性产物的分离纯化夏活性产 物的作用机理等万面的研究 【摘要】目的构建呲折p2为药物作用靶点的药物筛选模型并进行药物筛选．方法应用基因工程 El颅骨细 及细胞I程n法构建以小鼠帅-2远端启动子与黄光素酶报告基目相连的质粒转染小鼠MC3T3 2表达的活性物质应 胞以荧光素酶衷遮量评价#me2启动子活性通过测定模型荧光强度筛选上调BMP 月所选模型对合成化台物库厦微生物发酵产物库进行高通量筛选对筛得的活性特进行结构鉴定对活性 物产生苗进行分类鉴定结果该模型可用于抗骨质疏松药物的筛选由苗株04—5195发酵液中筛得上调brr# 51 2启动子活性物质Amico帅acinB苗株0495被鉴别为诺卡苗属中一个新种．结论应用所构建筛选模 51 BAmi—cin 型筛得活性物质产生菌株04 95该活性物质被命名为。45195A经结构鉴定为Am,co--tin B具有上调bmp2启动子的活性。 B忡2PG[3-BasicPYJ04一目95．Amicou脚cin 【关键词l B．诺卡氏茁属 ocs} 骨质疏挂症旧sIeopoross)是幽于以清除受损碎片形成骨洞为主要作用的破骨细胞(oste。clasts obs)之间功能失调所致的骨疾病易导致运动 和蹦沉栝钙质填充骨洞为主要作用的成骨细胞(ostecbtasl 机能障碍及病理性骨折大大影响人们的生活质量随着世界^口老龄化进程的加快寻找有效的可防洁骨 质疏松的药物厦方法已成为当前的重要课题特SI是通过改善骨质的形成代谢增强成骨细胞的作用最终 达到恢复患者正常骨水平的骨质疏松治疗方寨E9益受到^们重视． 2 BMP 骨形态开}成蛋白园子II{bonemorphogeneBcprotein 2)是一个由396个氪基酸组成的糖基化多 肚属于转化生长因子TGF—B起家族成员。其最初台成为前体肽加工后通过=硫键连接成二聚倒1人类 8MP 2基困定位于20pl2^小鼠犬鼠的BMP一2成熟片断具一致性． 太量研究证明BMP2可增加成骨细胞分化标志碱性磷酸酶和骨钙蛋白等基因的表选促进骨小节形成厦 随后的骨层次化在成骨细胞分化过程中起非常关键的作用 因此对于BMP2基因的作用成为衡量某些药 物先导化台物抗骨质疏松活性的重要指标为此本宴验室杨隽博士建立了以BMP一2为靶点的抗骨质疏挫新药 筛选模型我们以PGL3-Basic为基础利用双酶切方法将小鼠b呷2启动子与萤火虫荧光素酶报告基因相连 淼、2nnG j跹北京地区药学学术年会 IPA 20∞12．22·23 构建成药物筛选质粒．转染小鼠颅骨细胞MC3T3-E1．通过检测细胞裂解产物中的荧光素酶的表达量作为代测 样品促BMP一2基因表达的筛选指标。