PDTC对高糖培养大鼠肾成纤维细胞中MCP-1表达的影响.pdfVIP

PDTC对高糖培养大鼠肾成纤维细胞中 MCP一1表达的影响* 王敏莲 李 竞 陈 进 [中图分类号]R587．1[文献标识码]A[文章编号]1005—1740(2009)03--0006--03 30mmol／L葡萄糖；(3)高糖+PDTC1组：30mmo／ PDTC；(4)高糖+PDTC2组： 圆黧篡戮溅磊 L葡萄糖+5t-mol／L PDTC，分别于24h、 30mmo／L葡萄糖+10t_￡mol／L 获得3次可重复性结果。 1．3 tuRNA表达 RT—PCR检测各组MCP一1 细胞总RNA提取按照Trizol说明书进行。 录合成eDNA，以此为模板用引物经PCR扩增，反 应终产物体积为25／A。引物由上海生工合成。 4C CA一3，扩增条件为：94℃3min，94℃50s，5650s， 1材料与方法 1．1试剂与仪器 CCAGGATGCCCTTTATT一3，5一 DMEM／F12培养基、胎牛血清均购自美国 下游引物： Gibco公司，Trizol试剂及苯甲基磺酰氟购自美国 Invitrogen公司，引物由上海生工合成，逆转录试剂 盒和PCR试剂盒购自立陶宛Fermentas公司，抗 MCP一1一抗购于美国Abeam公司，二抗购于武汉5％琼脂糖凝胶电泳，紫外透射灯下观察结果，应用 凝胶电泳图像扫描分析系统进行分析，以目的基因 博士德公司，化学发光检测试剂购自美国Pierce公 司。NRK细胞购自上海中科院细胞库。 片段与GAPDH片段的条带灰度比值表示MCP一 1．2细胞培养及分组 1mRNA的相对含量。 1．4 Western 复苏NRK，使其生长于DMEM／F12培养液 Blot检测各组MCP一1蛋白 中，在含5％coz，37℃恒温培养箱内孵育，待细胞长 至亚融合状态时，更换为无血清的DMEM／F12培5min)，苯甲基磺酰氟裂解细胞，冰上放置30min，离 养基使细胞同步化24h，然后随机分为4组继续培心取上清(4℃，12 酸测定试剂盒说明书进行蛋白定量，聚丙烯酰胺琼 *[基金项目]湖北省自然科学基金(编号：2007ABAl34) 脂糖凝胶电泳。电泳后用硝酸纤维素滤膜进行蛋白 [作者单位]武汉大学人民医院，邮政编码武汉430060 转印，观察转印效率，并记录蛋白质标准品的位置。 本文2009--05--12收到，2009--06--22修回，2009--06--28接受 分别用抗MCP一1的一抗和二抗进行孵育结合。按