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菌种检测和扩培 星期一过来，检查是否有产酸菌落（菌落初始白色，后变黑，由于筛选培养基中加有溴甲酚绿指示剂，黑曲霉产酸会与之反应，在菌落周围形成一个透明的变色圈。）； 并显微检测其是否为黑曲霉（分生孢子头呈褐黑色放射状，分生孢子梗长短不一，顶囊球形，双层小梗，分生孢子褐色球形。）确证后将其连续划线转接至PDA培养基上扩增培养。 黑曲霉的图片 实 验 六 产酸黑曲霉的分离和培养 实验目的 掌握真菌的分离、培养基本方法。 获得黑曲霉菌种 实验原理 土壤是微生物生活的大本营，为了获得某种微生物的纯培养，一般是根据该微生物对营养、酸碱度、氧等条件要求不同，而供给它适宜的培养条件，或加入某种抑制剂，淘汰其他一些不需要的微生物，再用鉴别培养基筛选所需目的菌株。 稀释涂板法、稀释混合平板法、划线分离 实验材料 样品：新鲜土壤样品（同学自备）。 筛选培养基：查氏培养基（培养基中加人少许溴甲酚绿指示剂）。 无菌水：带有玻璃珠装有20mL无菌水三角瓶。 其它：无菌培养皿、无菌吸管、无菌离心管、电子天平、记号笔、玻璃涂棒、酒精灯、火柴。 试剂：400U/mL庆大霉素液、10％苯酚 土壤样品的采集 用土壤采样器，将表层5cm左右的浮土除去，取5～25cm处的土样10～25g，装入事先准备好灭菌容器内扎好。编号并记录地点、土壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。 实验步骤 根据土壤特点 1.土壤有机质含量和通气状况 2.土壤酸碱度和植被状况 3．地理条件 4．季节条件 根据微生物生理特点采样 1.根据微生物营养类型 2.根据微生物的生理特性 制平板： 在融化好的查氏培养基中加入庆大霉素素0.2mL/瓶 每组制2块PDA培养基、3块查氏培养基平板。 在无菌培养皿底部注明分离菌名、稀释度、组别、班级。 实验步骤 制备土壤稀释液： 1. 称取土壤2g，放入18mL带有玻璃珠的无菌水三角瓶中，同时加入3滴10％苯酚溶液，振荡5min，即为稀释10－1的土壤悬液。 2. 另取无菌离心管3支，用记号笔编上10－2、10－3 、10－4 ，再加入0.9mL无菌水。从10－1的土壤稀释液中吸取0.1mL加入第一只离心管中，并在试管内轻轻吹吸数次，使之充分混匀，即成10－2土壤稀释液。同法依次连续稀释至10－3、10－4土壤稀释液。 在土壤稀释过程中，需换用不同的枪头 吸取稀释液 无菌操作法分别吸取10－2、10－3 、10－4土壤稀释液0.1mL，分别加在已制好的3块查氏平板培养基上。 涂板 用玻璃刮铲将稀释液在培养基上充分混匀铺平，正置于恒温箱培养。 培养 置于30℃培养72小时。 黑曲霉的菌落 分生孢子头
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