人ROR_tmRNA实时荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用【荐】.pdfVIP

( ) 第 19卷第 5期 江 苏 大 学 学 报 医 学 版 Vol. 19 No. 5 2009年 9月 　 ( ) 　 Sep t. 2009 Jou rnal of J iangsu U n iversity M edicine Edition 　 　 　 　 　 　 γ 人 ROR t m RNA 实时荧光定量 PCR 检测方法的建立及初步应用 1, 2 1 1 3 3 王海生 , 王胜军 ,崔大伟 ,陈建国 ,柳迎昭 , 1 1 1 1 1 杨先知 , 史 　烨 , 田　洁 , 仝 　佳 , 许化溪 ( 1. 江苏大学基础医学与医学技术学院免疫学和免疫检验学系 ,江苏 镇江 2 120 13; 2. 武进中医院检验科 ,江苏 武进 2 13 16 1; 3. 江苏大学 附属人民医院检验科 ,江苏 镇江 2 12002) γ( ) [摘 　要 ] 　目的: 建立检测人 ROR t retinoidrelated orp han recep tor gamm at mRNA 的 SYBR Green Ⅰ实时荧光定量 ( ) γ PCR realtim e fluore scence quan titative PCR , qR TPCR 方法 。方法 : 根据人 ROR t mRNA 的保守序列设计特异性引 ( ) 物 ,提取经 PMA 和离子霉素刺激的人外周血单个核细胞 p eripheral b lood mononuclear cell, PBMC 总 RNA ,并逆转录 γ 成 cDNA ,与 pMD 18T载体连接构建质粒标准品。采用 qR TPCR 方法检测 ROR t mRNA 水平 ,并评价该方法的线性 、 ( ) γ 特异性及重复