以聚丙烯腈纤维为载体制备固定化青霉素G酰化酶的研究.pdfVIP

维普资讯 4l誊 4期 微 生 物 学 报 V0l4l N0 4 2001年 8爿 Acta icmb 乇0幽 8Siaica August 200I 以聚丙烯腈纤维为载体制备固定化青霉素 G酰化酶的研究 鲜海军 王侦祥 (中国科学 院微生 物研 究所 北 京 】0OO8O) 摘 要 ：以酸部分水解聚丙烯腈纤维为载体 ．以戊二 醛为交联剂 ，共价键结合制备 了固定化胞 外青霉素 G酰化酶 。当水解后 的载体 中一N 基含量为 690ttmol／g和含水量为 64％时 ，对酶蛋 白的固定 量过 100mg／g以上 ，固定化酶 的活力过 23001U／g，酶括力 包产率 为 30％ ，固定化教 率 为 56％ 酶活力的总产率和 固定化率随加 酶量 的增加 而 降低 。该酶 可 将浓度 为 2．5％一 l25％的青霉素 G钾盐水解 98％ 上 批投青霉素 G钾盐为 lOg，酶负荷为 150IUJg(PGK)．经 加 批水解反应后 ，剩余酶 活力为 80％ 用二硫基苏醣醇处理 固定化酶 ，对水解青霉 素 G钾 盐 的操作稳定性有促进作用 固定化酶 的室温保存半衰期为 130d。用戊二醛和 硼氢化钠溶 液 处理 同定化 酶后 ，酶活力的室温保存稳定性有所 降低 关键词 ：青葛素酰化酶 ，固定化酶 巨大芽孢杆菌 中圈分类号 ：0814 文献标识码 ：A 文章编 号 ：0001—6209 《2001)04-0475—06 青霉素 G酰 化酶 (PGA)在催 化水解青 霉素 G(PenG)生产 6．氨基青霉 烷酸 (6-APA)和 催化 水解头孢 霉素 G(Cep G)生产 7．氨基 3一脱 乙酰 氧基 头孢烷 酸 (7-ADCA)具有 反应速度 快 。条件温和 ，产品易提纯和环境污染小等特点 ，因此受到广泛关注 。固定化青霉素 G酰 化酶 已成为一种重要 的医药工业用酶 。制备 固定化青霉索酰化酶 的方法有多种 ，常见 的 有包埋法 ，吸附法和共价结台法等 一 用聚丙烯腈纤 维制备 固定化青霉 素酰化酶 的研 究最早见于 日本”。根据我 国的实际情况 ，本课题组 以聚丙烯腈纤维为载体对青霉 素 G 酰化酶 的 固定化进 行 了大量 的工作 。在此基础 上 ，本文报道 用酸 部分水解 聚丙烯腈 纤 维为载体制备 固定化青霉素 G酰化酶 的研究结果 。 1 材 料 和 方 法 1．1 材料 聚丙烯腈纤维为上海金 山化工厂生产 ．青 霉素 G钾 盐 (PGK)为河北制药 厂生产 ．二硫 基苏醣醇 (DTF)为上海脑海生物公司进 口分装 ，戊二醛 (GA)，对二 甲氨基苯 甲醛 (PDAB)， 磷酸氢二钾和磷酸二氢钾等化学药 品，均为 国内市售试剂 。青霉素 G酰化酶液为本研究 组选育的巨大芽孢杆菌(Bacilhts um)在液体培养基 (葡萄糖 1％，蛋 白胨 0．6％，尿 素 0．06％，酵母膏 05％．苯乙酸 0．8％，pH7．0)中培 养后 的发酵液 经 吸 附 ，洗脱浓 缩 的部 分 纯化酶液 。，比活力为 45IU／mg蛋 白。 1．2 方法 1．2．1 固定化 酶 的制备 ：把 聚丙 烯腈纤维经 胺化 处理 ，将其 中的一CN基 转变为一NH 国家重点科技攻兰项 目(85．722-03．05) 作者苘舟 ：鲜海 军 (】949一)，男 ，四川省^ ．副研 究员 ．主要从事生物化学和懒生物 学研 究 。 收稿 13期 ：2000-09．28。俸 回13期 ：2001-02．06 维普资讯 476 微 生 物 学 报 基 。用戊二醛作交联剂 ，将酶蛋 白以共价键方式联结在纤维上制成 固定化酶”。 1．2．2 酶活力的测定 ；采用对二 甲氨基苯 甲醛 (PDAB)比色法 ，在青霉素 G钾盐浓度为 2