糖化酶工业株的鉴定和糖化酶基因的克隆.pdfVIP

维普资讯 ● t l ● inllCULTUR|E 华北农学报 ·2007，22(1)：103．107 I岫 Hi-81HI∞ 糖化酶工业株的鉴定及糖化酶基因的克隆 马丽娜，陈喜文，陈德富 (南开大学 生命科学学院，天津 300071) 摘要 ：对4种糖化酶工业株的rDNA片段进行克隆，在对 比其 rDNA．ITS1序列与GenBank数据库的基础上 ，结合形 态学观察对菌株进行了鉴定。结果显示，4种菌株分别为黑曲霉、无花果曲霉、米 曲霉和灰色小克银汉霉。通过 Me． gA~s．得到的进化树表明，前 3种菌株亲缘关系较近 ，三者与灰色小克银汉霉 的亲缘关系较远。进一步克隆了黑 曲 霉 、无花果曲霉和米曲霉的糖化酶基 因，并在毕赤酵母 中实现 了分泌表达。 关键词 ：rDNA—ITS1；进化树 ；曲霉 ；糖化酶 ；毕赤酵母 中图分类号：Q949．32，Q556 ．2 文献标识码 ：A 文章编号：1000—7091(2007)01—0103—05 IdentificationofIndustrialStrainsforGlucoamylaseProductionand GeneCloningofGlucoamylase MA Li-na，CHEN Xi—wen，CHEN De—fu (CollegeofLifeSciences，NankaiUniversity，Tianjin 300071，China) Abstract：SequenceoftherDNAswereisolatedandseuq encedfromfourindustrialstrainsofglucoamylaseproduction． BasedonBLASTnanalysisofITS1nadtheirmorphological features，fourstrainswereidentifiedas Aspergillusniger，A． 一 cuum ，A．oryzae，nad Cunninghamellabertholletiae．PhylogenetictreeconstructedbyMegAlign indicatesthatA．niger， A． uum nadA．oryzaearecloselyrelated，whileC．bertholletiaeareawayfrom thegroup．Theglucoamylasegeneswere clonde from theformerthreestrains，nadfinallythesegenesgetsecretedexpressionin Pichiapastoris． Keywords：rDNA—ITS1；Phylogenetictree；Aspergillus；Glucoamylase；Pichiapastoris 对于大多数真菌来说 ，核 rDNA基 因群 的一个 2．1．3)，是一种酸性糖苷水解酶 ，从淀粉或淀粉类似 重复单位 (rDNA)自5方向包括非转录区(Nontran． 物分子的非还原端顺序切开 a一1，4-糖苷键 ，生成 scribedsequence，NTS)、外转录间隔区(Extemaltran— 葡萄糖_4j，是我国产量最大的酶制剂产品，在酒精工 scribedspacer，ETS)、18SrDNA基因、内转录间隔区1 业 、淀粉糖工业、制酒业 中具有重要应用价值_5J。我 (Internaltranscribedspacer1，ITS1)、5．8SrDNA基 因、 们收集了4株糖化酶工业株，为克隆其糖化酶基 因， 内转录间隔区2(Intemaltranscribedspacer2，ITS2)、 应先确定其种属关系。本研究采用 rDNA基 因群同 28SrDNA基因、基因间区(Intergeneregion，IGR)和 5 源性及生物学观察相结合的分类方法确定供试株分 SrDNA基因等区