ATP对胞内钙信号调控机制研究.pdfVIP

维普资讯 第 4O卷第 2期 华 中师范大学学报(自然科学版) Vo1．40 No．2 2006年 6月 JOURNALOFCENTRALCHINANORMALUNIVERSITY(Nat ． Sci．) Jun．2OO6 文章编号 ：1000—1190(2006)02—0244—04 ATP对胞内钙信号的调控机制研究 谢 丽 ，张 铭 (1．华 中科技大学 生命科学与技术学院，武汉 430074；2．华中师范大学 生命科学学院，武汉 430079) 摘 要 ：以大鼠胰腺 p细胞和 INS-I~细胞系为研究对象，采用显微荧光测钙技术 ，研究 了胞外 ATP对胞 内Ca抖信号的影响，初步探讨 了其作用机制．实验表明：胞外 ATP能够分别使大鼠胰腺 p细胞和 INS-1细胞 内的游离Ca 浓度显著升高，但 2种细胞的钙信号来源不同．在大 鼠胰腺B细 胞 中，胞外 ATP主要通过动员胞内钙库释放而引起胞浆 内Ca”浓度显著增高；而在 INS-1细胞 内，胞外ATP主要通过引起胞外Ca2 内流而引起胞浆 内Ca抖浓度增加． 关键词 ：胞外 ATP；胞 内Ca抖浓度 ；钙库 ；p细胞 ；INS-1细胞 中图分类号：Q26 文献标识码 ：A 细胞 内Ca 作为重要的第二信使 ，广泛存在 P2X和 P2Y2种嘌呤受体[6]．胞外 ATP对胰岛素 于各种类型的细胞反应中．细胞在静息状态下 ，胞 分泌的调节是通过 P2Y受体介导的E ]．P2Y受 浆内自由Ca 浓度在 i00nmol／L左右 ，而胞外环 体的信号传递机制被认为是通过激活 PLC信号系 境 Ca 浓度在 mmol／L级水平 ，很大的 电化学梯 统 ，产生第二信使物质 IP3，激活 IP3受体，从而动 度使得细胞一旦被刺激，可以在毫秒的时间范围内 员胞内钙库释放，使胞内Ca 浓度增加[7]． 使胞 内Ca 浓度达到 ~mol／L水平．细胞质膜上 本课题以单个大 鼠胰腺 B细胞和 INS-1细胞 有多种不同的通道可以在刺激条件下，控制胞外环 为研究对象，采用显微荧光测钙技术，主要研究了 境中的Ca 流入胞内．胞内钙库释放也可引起胞 INS-1细胞 内钙信号来源并进一步确认 了原代胰 内同等效力Ca 浓度升高，胞内钙库主要有内质 腺B细胞 内的钙信号反应．发现胞外 ATP能够使 网／肌质网钙库(ER／SR)、线粒体、高尔基体、细胞 大 鼠胰腺 B细胞和 INS-1细胞内的游离 Ca 浓度 核以及酸性囊泡库等．它们在相应 的刺激条件下， 显著升高，但 2种细胞的钙信号来源不同．在大 鼠 也会 引起 Ca 释放．而胞浆 内Ca 清除主要通 胰腺 细胞中，胞外 ATP主要通过动员胞内钙库 过 ：质膜上 的 Na ／Ca 交换 (NCX)、质膜上 的 释放而引起胞浆 内Ca 浓度显著增高，而在 INS-1 Ca抖一ATPase(PMCA)、内质网／肌浆网上的 Ca抖一 细胞 内，胞外 ATP主要通过引起胞外Ca 内流作 ATPase(SERCA)以及线粒体上 的协 同转运体 用引起胞内Ca 浓度升高． (uniporter)．这些 Ca 转运和清除机制通过复杂 1 材料与方法 精细的调控作用 ，维持着胞 内Ca 浓度 的稳态 平衡． 1．1 细胞培养和溶液 细胞外 ATP作为一种重要 的信号分子 ，通过 原代胰腺B细胞的制备和培养 ]：雄性 wistar 作用于细胞膜上的特异受体来调控细胞内的各种