植物基因克隆技术的发展与展望_陈儒钢.pdfVIP

（学术版） - 13 - JOURNAL OF CHANGJIANG VEGETABLES 2009 （20 ）：13－18 DOI:10.3865/j.issn.1001-3547.2009.20.004 植物基因克隆技术的发展与展望 陈儒钢 巩振辉 逯明辉 李大伟 黄炜 （西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌， ） 712100 摘 要 基因克隆技术是生命科学技术领域里非常重要的部分， 为了纵览植物基因克隆的理论和技术的发展创新 历程，对各种技术体系，正向遗传学途径、反向遗传学途径（包含定位克隆和同源序列克隆及随后发展起来的电子克 隆）进行了综述。 随着后基因组时代的到来，植物基因克隆技术将发挥更加重要的作用。 关键词 基因克隆 功能克隆 定位克隆 转座子标签法 抑制性差减杂交 同源序列法 基因芯片 电子克隆 植物基因的克隆技术是生命科学研究的重要组成 能着手进行基因克隆， 是人类采用的第一个克隆基因 部分，是现代生命科学技术中最核心的内容，它是随着 的策略。其基本内容为：根据已知的生化缺陷或特征确 世纪 年代初 体外重组技术的发明而发展 认与该功能有关的蛋白质， 分离纯化蛋白并测定出部 20 70 DNA 起来的， 其目标是识别和分离特异基因并获得基因完 分氨基酸序列，根据遗传密码推测其可能的编码序列， 整序列，确定其在染色体上的位置，阐明其生化功能， 设计相应的核苷酸探针， 杂交筛选cDNA 文库或基因 并利用生物工程手段应用到生产实践中去。一般来讲， 组文库，或者使用该蛋白质特异的抗体，筛选表达载体 基因克隆的策略可分为两种途径： 正向遗传学途径和 构建的cDNA 文库， 通过抗原抗体反应寻找特异的克 反向遗传学途径。 正向遗传学途径以待克隆的基因所 隆，最后对选中的克隆测序，获得目的基因的序列。 用 表现的功能为基础， 通过鉴定基因的表达产物或表型 这一策略克隆基因的关键在于必须首先分离出一个纯 性状进行克隆，如功能克隆和表型克隆等；反向遗传学 的蛋白，测定出其一部分氨基酸序列或得到相应抗体； 途径则着眼于基因本身特定的序列或者在基因组中的 其次要构建cDNA 文库或基因组文库； 然后要对文库 特定位置进行克隆，如定位克隆、 同源序列法克隆等； 进行杂交筛选。Li L G 等通过功能克隆的方法，从拟南 随着DNA 测序技术和生物信息学的发展，又产生了电 芥中克隆到一个解毒外运载体蛋白基因AtDTX 1，并发 子克隆等新兴克隆技术。 目前，在玉米，水稻、油菜、拟 现了一个包含至少 个编码相关蛋白基因的基因家 56 [1] 南芥、烟草、番茄等多种植物中，已经克隆了许许多多 族 。 随着生命科学研究的深入，以及蛋白质双向电泳 与植物的产量、品质、抗性及农艺性状等相关的基因。 技术和蛋白质测序技术的日趋成熟与完善， 各种差异 现对在植物基因克隆过程中运用的主要技术进行综 表达的蛋白质将被大量分离纯化， 必将给功能克隆提 述，以把握植物基因克隆技术的发展历程，并对未来的 供更好的条件，使之得到更加广