绿色荧光蛋白及其在分子寄生虫学研究中的应用.pdfVIP

中国寄生虫学与寄生虫病杂志　1997; 15( 1) ∶51- 53 Ch inese Journal of Parasito logy and Parasitic D iseases ·51 · 绿色荧光蛋白及其在分子寄生虫学 研 究 中 的 应 用 陆惠萍 　 孙树汉 第二军医大学分子遗传学教研室　上海 200433 　　生物发光现象在海洋无脊椎动物中是很 野生型GFP 吸收紫外及蓝光, 其最大吸 普遍 的。如腔肠 动物 门的水母 A equorea 收峰在 395 nm , 另有一个 475 nm 处小峰; 发 v ictoria 当受到机械刺激时会发出绿光。对于 出光为绿光, 最大波长为 509 nm , 在 540 nm 腔肠动物门如栉水母等具有生物发光作用的 处有一肩。GFP 发光非常稳定, 没有光漂白 蛋白质的特性已有了较深入的研究。腔肠动 (pho tob leach ing) 现象。 物的绿光是源于一类蛋白质叫绿色荧光蛋白 A equorea GFP 的发光机制如 图 1 所 ( , ) [ 3 ] 2+ ( ) green fluo rescen t p ro tein GFP 。自本世纪 示 。当Ca 结合到光蛋白 aequo rin 上后, 60 年代起, 对 GFP 的生物化学性质及其发光 激活的aequo rin 氧化所结合的荧光素 (coe 机制已有了较多的研究; 1992 年, P rasher 等 len terazine) , 同时释放能量激发GFP 在活体 克隆了 的 [ 1 ]; 等 内产生绿光, 在体外产生蓝光。 激 A equorea GFP cDNA Chalfie A equo rin 在原核和真核系统中表达了克隆的GFP 基因, 发 GFP 产生绿光的机制尚未阐明。 在各种不同的细胞中均可产生明亮的绿色荧 　 [ 2 ] 光 。这引起了人们对 GFP 作为一个全新的 报告基因系统的极大兴趣。本文就GFP 的生 　 化特性、基因结构、突变体研制及在分子寄 　 生虫学研究中的应用前景, 作一简单介绍。 　 1　GFP 的生化特性及发光机制 　 从A equorea 中分离纯化 的 GFP 是 30 　 kD a 单体, 是一个相当稳定的蛋白质, 对热、 图 1　 的发光机制 A equorea GFP ( 碱性pH 、有机溶剂及多数蛋白酶 除p ronase ) 外 均可耐受。如经 1% 、8 脲、甲 2　 的克隆及其突变体研究 SD S m o l L GFP cD NA 醛固定后, GFP 的发光仍可保持; 许多有机 A equorea v ict