1株抗重金属铬细菌的分离、鉴定和抗性基因型的初步研究.pdfVIP

第27卷第2期 华中农业大学学报 Vol-27No．2 of 2008年4月 Journal HuazhongAgrieulturalUniversity Apr．2008，248～250 1株抗重金属铬细菌的分离、鉴定及 抗性基因型的初步研究★ 周 围” 李友国2’ 程国军D一 杨 凯D (1’中南民族大学生命科学学院，武汉430074；2’华中农业大擎农业微生物学国家重点实验室，武汉430070) 摘要从湖北省某重金属矿区土壤中分离到1株抗甜+(Ⅵ)的菌株，命名为慨7。该菌株可以在含 12 rmDl／I—j勺C矿(Ⅵ)培养基上正常生长。经对该菌株进行形态观察和16SrDNA序列比对分析，确认该菌株为巨大 芽孢杆菌百缸i彪搬粥孵纫{柳z。通过构建系统发育树，分析了该菌在系统发育中的地位。对MDS。7进行了重金属抗 性谱研究，结果表明该菌株对cr、乙、Ni等重金属具有较高的抗性。进一步研究发现，MDS07菌株同时含有c矗rB、∞国 和，融等基因，它们分别具有Cr、盈、Ni等重金属抗性，表明MD607菌株的重金属抗性是由抗性基因引起的。 关键词抗铬(Ⅵ)细菌；分离鉴定；重金属抗性基因 中图法分类号X172 文献标识码A 文章编号 1000一2421(2008)02一0248—03 重金属铬及其化合物广泛应用于电镀、鞣革、颜 99mL无菌蒸馏水并带有玻璃珠的三角瓶中，放置 料、油漆、合金、印染及印刷等行业，它常以废水、粉 于28℃摇床内振荡30min。然后取样做梯度稀释 尘、蒸汽等形式污染土壤、水源和空气，因此其对人 5 后，涂布在含K2Cr04 类的危害不可忽视。铬的毒性与其存在的价态有 养基平板上，置于37℃生化培养箱中培养48h后， 关，六价铬及其化合物都溶于水，毒性也最强，三价 从中筛选出Cr6+的抗性菌株。 铬毒性却很小。有些微生物对六价铬有抗性，它们 rDNA的PCR扩增和序列测定 1_2抗性菌株16S 当中有些可以把铬从高毒的六价还原成低毒的三 将菌体摇床培养至对数期，离心并收集菌体，抽 价，具有巨大的应用潜力。但自然界生存的重金属 提基因组总DNA。依据细菌16SrDNA中最保守 超积累生物种类较少，需要利用生物工程的手段进 序列设计并合成引物，引物序列分别为：正向引物 行改造和培养，赋予生物以重金属超积累能力。目 7一 7一AAGGAGGTGATCCAGac一3 (5 7)；反向引物(5 前这方面研究主要集中在重金属污染土壤植物修复 方面[1矗]，而以微生物为手段进行的重金属污染修 体系为100“L，所用程序为：预变性：94℃，3min； 复研究国内尚少见报道，具有很好的研究与发展前 变性：94℃，30s；退火：56℃，1min；延伸：72℃， 景[2]，研究和运用微生物与重金属间的相互作用将 2min。循环次数30，最后再72℃延伸7min。16S 具有明显的生态效益、社会效益和经济效益[3]。本 rDN