生化实验基本操作蛋白质呈色反应血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳.pdfVIP

实验一 生化实验基本操作 一. 玻璃仪器的洗涤 在生化实验中，玻璃仪器洁净与否，是获得准确结果的重要环节。洁净的玻 璃仪器内壁应十分明亮光洁，无水珠附着在玻壁上。 （一）常用的洗涤方法： 1.一般仪器，如烧杯、试管等可用毛刷蘸肥皂液、合成洗涤剂仔细刷洗。然后用 自来水反复冲洗，最后用少量蒸馏水冲洗2~3 次，倒置在器皿架上晾干或置于烘 箱烤干备用。 2.容量分析仪器如吸量管、容量瓶、滴定管等，不能用毛刷刷洗。用后应及时用 自来水多次冲洗，细心检查洁净程度，根据挂不挂水珠采取不同处理方法。（1） 如不挂水珠，用蒸馏水冲洗、干燥，方法同上；（2 ）如挂水珠，则应沥干后用重 铬酸钾洗液浸泡 4~6 小时，然后按上法顺序操作，即先用自来水冲洗，再用蒸馏 水冲洗，最后干燥。 3.粘附有血浆的刻度吸量管等，有三种洗涤方法：（1）先用45%尿素溶液浸泡， 使血浆蛋白溶解，然后用自来水冲洗；（2 ）也可用 1%氨水浸泡，使血浆溶解， 然后再依次用 1%稀盐酸溶液、自来水冲洗；（3 ）以上二法如达不到清洁要求， 可浸泡于重铬酸钾洗液 4~6 小时，再用大量自来水冲洗，最后用蒸馏水冲洗 2~3 次。 4.新购置的玻璃仪器，应先置于 1~2%稀盐酸溶液中浸泡 2~6 小时，除去附着的 游离碱，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗 2~3 次。 5.凡用过的玻璃仪器，均应立即洗涤，久置干涸后洗涤十分困难。如不能及时洗 涤，先用流水初步冲洗后浸泡在清水中，待后按常规处理。 （二）使用重铬酸钾洗液（以下简称洗液）时应注意以下几点： 1.需用洗液浸泡的容器，在浸泡前应尽量沥干。否则会因洗液被稀释而降低洗液 的氧化力。 2.Hg2+ 、Ba2+ 、Pb2+ 等离子可与洗液发生化学反应，生成不溶性化合物沉积在容 器壁上。因此，凡接触过上述离子的容器，应先除去上述离子（可用稀硝酸或 5~10%EDTA钠清除）。 3.油类、有机溶剂等有机化合物可使洗液还原失效。因此，容器壁上附有大量油 类、有机物时，应先除去。 4.洗液的酸性和氧化性很强，使用时应格外注意，千万不要滴落在皮肤或衣物上， 以免灼伤或烧坏。 5.洗液颜色由深棕色变为绿色时，说明洗液已经失效，应停止使用，更换新液。 因重铬酸变成硫酸铬后不再具有氧化性。 备注：重铬酸钾洗液的配制 取重铬酸钾 20g 溶于 20ml 蒸馏水中，加热至沸。冷却后再将 200ml 浓硫酸 慢慢加入，边加边搅拌。注意：此时可产生高热。为防止容器破裂，应选用耐酸 搪瓷缸或耐高温的玻璃器皿，切忌用量筒及试剂瓶等配制。为防止洗液吸收空气 中的水分而被稀释变质，洗液应贮存于带盖的容器中。当清洁效力降低时，再加 入少量重铬酸钾及浓硫酸就可继续使用。 二. 吸量管的使用 吸量管和定量吸(移)液器(微量加样器)均为用来转移一定体积溶液的量器。 （一）吸量管：生化实验中常用的有三种，最常用的是刻度吸量管。 1 中国生化仪器网 1.刻度吸量管： （1）刻度吸量管的种类： ①按容量规格来分，有 0.1、0.2、0.25、0.5、1、2 、5、10ml 等数种。其 精密度按不同的容积可达移取量的 0.1~1% 。通常将管身标明的总容量分刻为 100 等分。因此，10ml 的吸量管一格代表0.1ml ；1ml 的吸量管一格代表0.01ml,其余 类推。 ②按“零”点位置来分，有“O”点在吸量管上端的（即读数从上而下逐渐增 大），也有“O”点在吸量管下端的（读数从下而上逐渐增大) 。两种标示方法，在 使用时各有方便之处。 ③按刻度方法来分，刻度吸量管也有两种，一种是刻度刻到尖端的，将 液体放出时，应吹出残留在吸量管尖端的少量液体(我实验室的刻度吸量管全部 是这一种) ，另一种是刻度不刻到尖端的。 （2 ）刻度吸量管的正确使用方法：用右手拇指和中指夹住管身，将吸量管的尖 端伸入试液深处，左手持洗耳球把试液吸入管内至高过刻度以上时，迅速用右手 食指按住吸量管的上口，以控制试液的泄放。吸液后应尽量使吸量管保持垂直， 使右眼与刻度等高，稍微轻抬食指或轻轻转动吸量管，使试液面缓慢降落，至管 内试液弯月面的最低点与吸量管的刻度线相齐为止。然后将吸量管插到需加试剂 的容器中，让尖端与容器内壁靠紧，松开食指让液体流出。液体流完后再等 15 秒钟，捻动一下吸量管后移去（如需吹的吸量管，则吹出尖端的液体后再捻转一 下