酵母菌海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达及功能验证.pdfVIP

业生物技术学报 Journal of Agricultural Biotechnology 2005,13 (): ·研究简报· 酵母菌海藻糖合成酶基因在大肠杆菌中的表达及功能验证﹡ 红歌1 1 1 1 1 2 2 吴 坤 顾溯海 胡元森 贾新成 董志扬 金 城 （1. 河南农业大学生物技术与食品科学学院, 郑州 450002 ；2. 中国科学院微生物研究所, 北京 100080 ） 关键词: 6- 磷酸海藻糖合成酶基因 ; 表达; 功能验证 Expression of Trehalose-6-phosphate Synthase Gene in and Tests of Its Function CHEN Hong-Ge1 WU Kun 1 GU Su-Hai1 HU Yuan-Sen1 JIA Xin-Cheng1 DONG Zhi-Yang2 JIN Cheng2 ( ) trehalose-6-phosphate synthase gene ; expression; function test 海藻糖是由两个葡萄糖残基经 , -1,1 糖苷键 接而成 5 端引物：ATA CAT ATG ACT ACG GAT AAC GCT AAG ， 的非还原性二糖，大量试验表明，海藻糖不仅作为碳水化合 3 端引物：CAC AAG CTT CAG TTT TTG GTG GCA GAG 。 物以储存能量，还具有在冷冻、干燥、高渗透压等严酷环境中 1.4 海藻糖的提取和检测 保护生物膜和蛋白质结构的功能，还可保护DNA 免受放射 将带有 基因的转化子与带有空载体的转化子分别过夜培 引起的损伤 （Yoshinaga ., 1997 ）。海藻糖的这一独持性 养，以1%接种量转接于 100 mL LB 培养基中，37 ℃培养至 600 约 质可望用于干燥冷冻食品、药品和酶的稳定剂以及化妆品的 为0.4 时，加入IPTG 使终浓度达到 1 mmol/L ，诱导培养3 h 后加 保护剂等。 NaCl 至终浓度为0.5 mol/L ，继续培养3~4 h ，4 ℃ 4 500 r/min 离心收 在啤酒酵母中，海藻糖以UDP- 葡萄糖和6- 磷酸- 葡萄 集菌体，提取海藻糖的方法见Yang 等（2001 ）。 糖为底物先合成6- 磷酸海藻糖，再经去磷酸化作用而成为海 1.5 抗性实验 藻糖。在这一过程中，催化6- 磷酸海藻糖生成的6- 磷酸海藻 将上述2 菌的过夜培养物以1%接种量转接于50 mL 的LB 培 糖合成酶是关键酶，由 基因编码，本研究道 基因在 养基中，37 ℃培养至 600 为 0.4 时，加入 IPTG 使终浓度为 1 大肠杆菌中的