重组人突变型471TNF-α及野生型TNF-α的表达及活性初步鉴定.pdfVIP

第 卷第 期 西 安 交 通 大 学 学 报 （医 学 版 ） 24 1 Vol . 24 No . 1 年 月 ’ （ ） 2 0 0 3 2 ournal of i an iaotong University ed ci Feb . 2003 重组人突变型471TNF- 及野生型TNF- 的表达及活性初步鉴定 α α 李瑶琛，孔令洪，王一理，尚宁宽，耿宜萍，司履生 （西安交通大学生命科学与技术学院免疫病理研究室，西安 710061） 摘 要：目的 采用原核表达系统，表达人突变型471TNF- 蛋白，并检测其生物学活性。方法 采用PCR 技术 α 扩增突变型471TNF- 及野生型TNF- cDNA 片段，克隆入中间载体pUCm-T 中，并测序证实。以限制性内切酶切 α α 下目的片段，克隆入pBV220 中，转入大肠杆菌DH5 ，温度诱导表达野生型及突变型471TNF- 蛋白。初步纯化蛋 α α 白后，采用MTT 法评估两者对 L929 细胞的杀伤作用。结果 获得了测序正确的野生型TNF- 及突变型 ① α 的 克隆； 构建了正常人野生型 及突变型 重组表达质粒； 经温度诱导， 471TNF-α cDNA ② TNF-α 471TNF-α ③ TNF-α 及突变型471TNF- 蛋白均获得了表达； 初步的生物学活性研究表明，突变型471TNF- 蛋白的杀伤作用显著高 α ④ α 于野生型。结论 突变型471TNF- 的生物学活性优于野生型TNF- ，为进一步开展TNF- 的基础及临床研究奠 α α α 定了基础。 关键词： ；突变体；蛋白表达 TNF-α 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） R392 . 11 A 1671-8259 2003 01-0014-03 The expression of recombinant human mutant 471 TNF-αand with type TNF-αand the primary identification of their bioactivities ， ， ， ， ， Li Yaochen Kong Linghong Wang Yili Shang Ningkuan