传染性支气管炎病毒S1和N基因的遗传变异比较.pdfVIP

第四届中国兽药大会——兽医微生物学、兽医生物制品学学术论坛论文集(2012年) 传染性支气管炎病毒S1和N基因的遗传变异比较 秦卓明“2奉，徐怀英“2，曲新泽3，王友令1’2，黄兵1’2，李玉峰“2 (1．山东农业科学院，济南250100；2．山东家禽所禽病与免疫重点实验室，济南250100； 3．山东农业大学动物科技学院，泰安271018) 摘要：【目的】通过比较传染性支气管炎(IBV)流行株s1基因和N基因的核苷酸同源性及其基因分型，探讨s1和N 基因遗传变异的相关性。【方法l结合1992-2008年间分离鉴定的1 义的IBV毒株进行核苷酸同源比较，绘制系统发育树，进行基因分型比较。【结果】利用两种基因绘制的系统发育树结果相似， 示，s1和N基因的遗传变异正相关，二者符合率为75％，但s1基因的变异更具有多样性。 关键词：传染性支气管炎s1基因N基因遗传相关性 鸡传染性支气管炎(Infectious Bronchitis virus，IBV)引起的一种急性、高度接触性呼吸道病，主要侵害鸡的呼吸系统、泌尿生殖系统和消化系统， 可导致感染鸡发生呼吸困难、肾脏病变、肠道炎症、产蛋数量和蛋品质下降、甚至导致雏鸡死亡和产生“假 母鸡”，是一种生产意义重大、影响广泛的传染性疫病。IBV属于冠状病毒，其RNA聚合酶缺乏校正能力， 使得IBV极易发生点突变、基因缺失、插入和基因重组等，进而导致IBV的变异u一。。近年来对IBV变异的 研究主要集中在纤突蛋白(S)和核衣壳蛋白(N)／3J。 S蛋白不仅能介导病毒与易感细胞发生融合，决定病毒的毒力，而且决定病毒的抗原性。S蛋白裂解产 生新基因型和血清型的主要原因嵋’制。 N蛋白是唯一位于病毒内部磷酸化的结构蛋白，氨基酸中约有17％为碱性核苷酸，主要作用是包裹核酸， 使之容易装入病毒壳内，在进化过程中较为保守。核蛋白可以识别免疫的相关靶位，细菌表达系统产生的 IBV核蛋白可以诱发对整个病毒粒子的免疫应答。Sang等对IBV核蛋白的结构和功能进行深入研究后的结 果表明，在N蛋白C一末端前120个氨基酸为CTL抗原表位，可诱导细胞毒性T细胞反应，并对急性感染的 雏鸡具有保护作用，可见，N蛋白具有重要的细胞免疫功能。 本文从中国不同地区筛选了17株有代表性的毒株，对其S1基因以及N基因进行了克隆测序，并与国 内外经典毒株和疫苗株进行同源比较，基因分型；同时利用统计学软件进行相关性分析，该结果有助于我 们正确理解中国IBV的分子遗传变异。 1材料与方法 1．1 分离鉴定从四川，山东等地多个疑似感染IB的鸡群中，采集气管、肾和肺等组织，按常规进行病 毒分离，结果获得20株IBV，筛选17株进行相关检验。 H120等。上述毒株的GenBank序列号均在系统进化树上。 vector、 DNA聚合酶、pMDl8一T 1．3主要试剂Trizol、AMv、RNA酶抑制剂及dNTP混合物、高保真Taq 质粒提取试剂盒均购自宝生物工程(大连)有限公司；其他试剂均为国产或进口分析纯。SPF鸡胚由山东省 农业科学院家禽研究所SPF鸡场提供。 基金项目：山东省科技攻关项目(2009GGl0009006){山东省农业科学院创新基金项目(2008YCX017) t--——362‘__—— primier5．0设计2对引 1．4引物设计参照GenBank上已公布的IBV基因组S1和N基因序列用Primer 物，引物由上海生物工程有限公司合成。S—F：5’-GCGAAAACTG从C从从GAC一3’， N—R：5’—℃CACTCAAAGTTCATTCTCTCC一3’。 1．5 vector，转化大肠杆菌DH5a感受态细胞。过夜培 最终延伸lOmin。回收纯化的PCR产物连接到pMDl8一T 养，挑单菌落摇菌，收集菌液提取质粒，鉴定后送往北京六合华大