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优良转基因抗虫棉杂交组合单倍体的诱导与鉴定 生命科学院99级生物技术2班 白金 指导教师 山东棉花研究中心 张军 本研究主要是利用带芽黄标记基因的半配生殖品系vSg来诱导优良转基因抗虫棉杂交组合产生单倍体，并利用单倍体的微卫星标记准确地在苗期鉴定由vSg诱导的含有Bt基因的抗虫棉杂交组合单倍体。 实验材料 带芽黄标记基因的半配生殖品系vSg 鲁棉研15号F1代 优质陆地棉 321B 抗病陆地棉99R08 研究方法 嵌合体的形态学鉴定 卡那霉素抗性鉴定 Bt基因的PCR鉴定 利用微卫星标记鉴定目标单倍体 实验结果与分析 vSg的特征特性与自交表现 (vSg×鲁棉研15号F1) F1及（vSg×(321B×99R08)）F1的表现 田间卡那霉素抗性鉴定 嵌合体中的Bt抗虫基因鉴定 目标单倍体的分子标记鉴定 研究讨论 关于转Bt基因抗虫棉抗虫性的鉴定 利用半配生殖材料诱导单倍体 关于目标单倍体的鉴定 谢谢各位老师和同学！ * * 论文摘要： 利用单倍体加倍能够使优良基因快速纯合，从而加快育种进程。海岛棉半配生殖品系vSg (virescently marked semigamy line)能够高频率产生单倍体。利用vSg 作母本可以有效地诱导产生具有目标性状的单倍体。本研究以vSg与优良转基因抗虫棉杂交组合F1代为亲本进行杂交，诱导产生既具有Bt基因又具有优良性状基因的单倍体，并利用对Bt基因的检测和分子标记技术对目标单倍体进行了早期鉴定研究，以为今后的单倍体加倍育种奠定基础。关键词：转基因抗虫棉 单倍体 半配生殖 早期鉴定 实验材料 研究方法 实验结果与分析 讨论研究 海岛棉半配生殖材料vSg 的单株 海岛棉半配生殖材料vSg 的群体 vSg的自交株 vSg的正常株 (vSg×鲁棉研15号) F1代中偏父型嵌体 (vSg×鲁棉研15号) F1代偏母型嵌合体 (vSg×(321B×99R08) ) F1代中偏父 嵌合体 (vSg×(321B×99R08) ) F1代中偏母 嵌合体 (vSg×鲁棉研15号) F1代父性单倍体点涂卡那霉素7天后的反应（抗） (vSg×鲁棉研15号) F1代嵌合体绿色叶片点涂卡那霉素7天后的反应（不抗） (vSg×(321B×99R08) ) F1代嵌合体绿色叶片点涂卡那霉素7天后的反应（抗） (vSg×(321B×99R08) ) F1代嵌合体绿色叶片点涂卡那霉素7天后的反应（不抗） 2000 1000 750 500 250 M 1 2 3 4 5 6 7 M 1-7为vSg与陆地棉品种间组合杂交F1的待鉴定个体 ，红色箭头指Bt特征带 。 2000 1000 750 500 250 100 M 8 9 10 11 12 13 M 8-10为vSg与陆地棉品种间组合杂交F1的待鉴定个体，11是15母本，12是15F1，13是鲁15父本，红色箭头指Bt特征带。 图10：微卫星标记（SSR1521）鉴定目标单倍体的结果。 1-6,11-15是vSg与陆地棉品种间组合杂交F1的待鉴定个体,7是鲁15母本，8是鲁15父本，9是vSg,10是99R08，11是321b，红色箭头指vSg的特征带，蓝色箭头指没有vSg标记基因型的个体，为鉴定出的目标单倍体。 250bp 200bp 150bp 100bp M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 1112 13 14 15 M 图11：微卫星标记（SSR1604）鉴定目标单倍体的结果。 1-6,11-15是vSg与陆地棉品种间组合杂交F1的待鉴定个体,7是鲁15母本，8是鲁15父本，9是vSg,10是99R08，11是321b，红色箭头指vSg的特征带，蓝色箭头指没有vSg标记基因型的个体，为鉴定出的目标单倍体。 M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 M 250bp 200bp 150bp 100bp