菠菜中色素.的提取分离和鉴定(有机化学实验).docVIP

菠菜中的色素提取、分离及鉴定 一、实验目的 1.进一步熟悉和掌握薄层色谱的原理及应用 2.了解菠菜中主要色素的基本性质，通过菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法及原理 3.掌握用紫外光谱和荧光光谱鉴别菠菜中色素的原理及方法 二、菠菜中的色素简介 菠菜叶中富含多种色素成分,如叶绿素（绿色）、胡萝卜素（橙色）和叶黄素（黄色）等多种天然色素。 叶绿素存在两种结构相似的形式即叶绿素 a(C55 H72O5N4Mg) 和叶绿素 b(C55H7O6N4Mg)，二者差别仅是 a 中一个甲基被 b 中的甲酰基所取代。它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物，是植物进行光合作用所必需的催化剂。植物中叶绿素a的含量通常是b的3倍。尽管叶绿素分子中含有一些极性基团，但分子中大的烷基结构使它易溶于丙酮,乙醇,乙醚,石油醚等有机溶剂。 胡萝卜素（ C40H56 ）是具有长链结构的共轭多烯。它有三种异构体，即 α-, β - 和γ - 胡萝卜素，其中β - 异构体含量最多，也最重要。在生物体内，β - 体受酶催化氧化即形成维生素 A 。目前β - 胡萝卜素已可进行工业生产，可作为维生素 A 使用，也可作为食品工业中的色素。 叶黄素（ C40H56O2 ）是胡萝卜素的羟基衍生物，它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍。与β - 胡萝卜素相比，叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小。根据这些色素在有机溶剂中的溶解性,可将它们提取出来。 叶绿素a叶绿素叶绿素a叶绿素 β-胡萝卜素叶黄素β-胡萝卜素R =H， 叶黄素R = OH） 菠菜中各色素的理化性质 绿色植物中的叶绿体色素在把光能转变为化学能的光和作用中起着重要作用。 叶绿体色素有叶绿素和类胡萝卜素两类，主要包括β-胡萝卜素，叶黄素，叶绿素a和叶绿素b四种色素，它们在叶绿体中的含量比约为2：1：3：1。叶绿素是植物进行光合作用所必需的催化剂。 (1)叶绿素a 有四个甲基与卟吩核连接(R—CH3)。蜡状蓝黑色微小晶体。熔点117～120。溶于乙醇、乙醚、丙酮、氯仿、二硫化碳和苯,不溶于石油醚。其乙醇溶液是蓝绿色，并有深红色荧光。 (2)叶绿素b 有三个甲基和一个醛基与卟吩核连接(R=—CHO)。蜡状蓝黑色微小晶体。熔点120～130。溶于乙醇和乙醚，难溶于石油醚。乙醚溶液有亮绿色。其它有机溶剂的溶液通常是绿色至黄绿色，并有红色荧光。可用作肥皂、脂肪、油蜡、食品、化妆品和医药用的无毒着色剂。由绿叶用乙醇萃取而制得,也可用化学方法合成。(3)胡萝卜素 胡萝卜素有多种异构体,是四萜类化合物。α-胡萝卜素为红色结晶。熔点187。旋光度+385°(c=0.08,苯)。溶于乙醚、苯、氯仿。β-胡萝卜素为红棕色结晶,熔点181,溶于乙醚、丙酮、苯、石油醚。γ-胡萝卜素为紫色棱形结晶，熔点177.5，溶于苯、氯仿。α-，β-和γ-胡萝卜素常共存于许多植物中，β-胡萝卜素含量最高。β-胡萝卜素在植物中几乎总是和叶绿素共存，含量最多的是胡萝卜、棕榈油以及多种绿叶植物。用做食物色素、保健食品，以及作防晒化妆品成分，还可用作制造维生素A的原料。 (4)叶黄素 又称胡萝卜醇(carotenol)。一类羟基类胡萝卜素的衍生物。以乙醚加甲醇精制，得黄色穗状物。具金 Rf值越大，样品与固体吸附剂吸附越紧，即样品与固体吸附剂分子间作用力越大，说明样品极性越强或分子量越大。 本实验利用有机溶剂将菠菜中的色素浸提出来，利用柱层析和薄层层析法将色素分离开来，根据各色素的颜色、分子极性与Rf值的关系、吸收光谱、荧光对分离出的色素进行鉴定归属，讨论结构对Rf值、吸收光谱的影响。 四.仪器试剂 新鲜菠菜、石油醚、乙醇、丁醇、中性氧化铝（柱层析用）、薄层层析硅胶、丙酮、苯、饱和食盐水、无水硫酸钠、羧甲基纤维素钠（CMC）、载玻片、研钵、层析缸、点样毛细管、层析柱、滴管、分液漏斗、烘箱、紫外分光光度计、荧光仪。 五、实验方法 1 薄层板的制备 称取适量硅胶G，按硅胶和水1∶3(w/w)的比例加入0.5%CMC水溶液，调成糊状，用倾泻法涂在干净薄层板上，轻轻振摇，使硅胶浆料均匀平整铺开，放置~1h, 晾干，置于烘箱中，逐渐升温至110℃活化0.5h,冷却，置于干燥器中备用。 2 样品制备 称取5克洗净晾干水分的新鲜的菠菜叶，用剪刀剪碎，放在锥形瓶中，加入30 mL 2﹕1（v/v）的石油醚和乙醇混合溶剂，浸没菠菜叶片，用玻棒搅动数分钟，以利于菠菜叶的细胞破裂，色素浸出。布氏漏斗抽滤，将菠菜汁转入分液漏斗，分去水层，分别用等体积的饱和食盐水和蒸馏水洗涤两次，以除去萃取液中的乙醇（洗涤时要轻轻旋荡，以防止产生乳化）。弃去水-乙醇层，石油醚层用无水硫酸钠干燥后滤入锥型瓶，置于暗处备用。 3 薄层层析 用吸管吸取菠菜