猪链球菌2型四川人源分离株ZYH24细胞外蛋白因子的原核表达与活性分析.pdfVIP

维普资讯 王海丽等 猪链球菌2型 四川人源分离株 ZY 24 3 ·247 · · 兽 医免疫学 · 猪链球菌 2型四川人源分离株 ZYH24细胞外蛋 白因子的原核表达及活 性分析① 王海丽 鞠爱萍② 王长军 潘秀珍 郑 峰 陆承平② 唐家琪 (南京军区军事医学研究所，南京 210002) 中国图书分类号 11392．9 文献标识码 A 文章编号 1000-484X(2007)03 247D4 [摘 要] 目的：克隆、表达猪链球菌2型四川人源分离株ZYH24细胞外蛋白因子基因片段 ，分析蛋白活性。方法：根据 GenBankSsuis2epf基因序列设计引物 ，克隆ZYH24株 epf基因片段并进行序列分析；构建原核表达质粒 pGEX4T-2-epf，在大 肠杆菌中诱导带有谷胱苷肽转移酶 (GST)标签的融合蛋白EF—GST的表达 ；亲和层析法纯化融合蛋 白EF—GST，用凝血酶切除 重组蛋白中的GST，获得纯化的EF抗原；SDS和Westernblot分析诱导表达及纯化的重组蛋 白。结果 ：序列分析表明， 获得的epf基因片段长895bp；原核表达的融合蛋 白EF-GST分子量约62000，凝血酶处理后的EF抗原分子量约 35000，两者 均可与制备的EF多克隆抗血清发生特异性反应。结论 ：成功克隆了人源分离株ZYH24epf基因片段，在原核系统实现高效的 功能性表达 ，为开展EF蛋 白的相关研究奠定了基础。 [关键词] 细胞外蛋白因子；原核表达；蛋白纯化 Prokaryoticexpression and activity detection oftruncated extracellular protein factorgeneofhumanStreptococcussuistype2 WANGHai—Li，JUAi—Ping，WANGChang—Jun．PANXiu—Zhen，ZHENGFeng，LUCheng—Ping。TANGJia—Qi． DepartmentofEpidemiology，ResearchInstituteforMedicineofNanjingCommand，Nanjing210002，China [Abstract] Objective：TocloneandexpressthetruncatedepfgeneofStreptococcussuistype2(S．suis2)strainZYH24isolated from apatientinZiynagCounty，Sichuanprovince，anddetectitsactivity．Methods：TheepfgenefragmentwasamplifiedbyPCRfrom ZYH24andclonedintoprokaryoticexpressionplasmidpGEX4T-2toform pGEX4T-2一epf．Theexpressionofrecombinna tproteinwith ‘ glutathioneS-transferase(GST)WasinducedinE．coliTG1nadhtefusionprotein(EF-GST)waspurifiedbyafiqnitychromatography， nadthenGSTwascutfrom EF-GSTwiththrombinprotease．Th eexpressedandpurifiedproteinswereanalyzedbySDS—PAGEna dcon— firmedbyWestern blot．Results：SequencenaalysisshowedthatthelengthoftheturncatedepfWas859bp．Theprokaryoticexpressed productionwasafusionprotein，whosemolecularweightwasabout62000，andthemoleculra weightofhtepurifiedEFproteinWaSa- bout